[发明专利]制作微珠的方法和微珠

说明书

技术领域

本发明涉及制作微珠的方法，也涉及微珠。更具体地，本发明涉及制作微珠的方法等，在制作微珠的方法中，给定类型的物质在表面上被固相化的微珠通过光刻胶法制备于基板上。

背景技术

在核酸、蛋白质等的生化分析中，目前已在使用称之为“微珠”的粒子载体。例如，在核酸的分析中，所用的微珠中，具有与靶核酸链相关的互补碱基序列的探针核酸链被固相化于其表面上。靶核酸链基于靶核酸链和探针核酸链之间的相互作用而分离。在蛋白质分析中，使用与靶蛋白相关的抗体固相化于微珠表面上的微珠按照类似的方式分离所述靶蛋白。

近来，在利用这些微珠的生化分析中要求更高的处理能力，人们正就此开发实现高速分析的技术。

在专利文献1中，例如，公开了“一种检测分析物的方法，所述分析物是样品内的多个分析物中的分析物，第一次提及的分析物采用各自的分析反应物识别，所述方法包括：(a)将多个群体(population)的荧光粒子与样品接触，这些群体分别具有不同的荧光信号和不同的分析反应物，其中分析反应物特异性地结合至样品中的一种分析物，而每一荧光粒子在其表面上具有至少一种用各个对应荧光染料标记的纳米粒子，(b)向所述样品中加入标记试剂，(c)检测标记，从而分析指示分析反应物与分析物的结合的荧光粒子，以及(d)根据与各自群体相关的不同荧光信号的功能，同时确定结合至各自分析物的荧光粒子的群体”参见权利要求23。

在由Luminex Trading，Inc.提供的“悬浮液阵列技术(Suspension ArrayTechnology)”中，基于这种技术，在微珠上标记了两种类型的荧光染料的同时，在发光颜色上赋予了变化，由此能够使最大100种类型的微珠相互区分开。根据“悬浮液阵列技术”，当不同探针核酸链和抗体分别固相化于100种类型的微珠上时，就有可能同时通过一次分析而分离和检测100种不同类型的核酸链和蛋白质。

在上述文献中，其记载了“荧光粒子的群体进一步根据其尺寸和形状进行检测”(参见权利要求25)并公开了对于区别微珠的其它参数，可以采用珠粒的尺寸和性状(参见该文献的第0037段等)。与此有关的是，在非专利文献1中，还描述了在流路中根据光刻胶法制备多种不同形状的微珠的方法。根据这种方法，制作超过1百万种类型的微珠变成可能。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利公开No.3468750

非专利文献

非专利文献1：“Multifunctional encoded particles for high-throughputbiomolecule analysis”.Science，2007，Mar.9；315(5817)：1393-6

发明内容

技术问题

在专利文献1和非专利文献1中公开的而具有不同荧光特性和形状的很多类型的微珠分别用彼此不同的探针核酸链或抗体固相化，并混合用作珠集(bead set)。这种珠集和包含靶核酸链的样品进行混合并冲洗，接着通过光信号、磁信号或电信号检测各微珠和其表面上捕获的靶核酸链。

为了获得高分析精度，在珠集中存在的微珠数必须是清楚的。例如，对于最简单的样品，其中两种类型的微珠信号强度相互进行比较，如果珠集中所含的两种类型的微珠数目(群体)均不清楚，则不可能对所得信号强度进行相互比较。在这种情况下，为了精确比较分析信号强度，期望两种类型的微珠以相同的数目存在，或者如果数目不相等，需要知道两种类型的微珠之间数量比率。

目前，在珠集中的群体通过在制备后基于重量和吸光度定量测定、并将其混合而进行了调节。然而，采用这种方法，不可能精确调节各种类型的微珠数目，由此引起群体变化，导致妨碍实现高分析精度。

因此，作为主要目的，本发明提供了一种能够供给包含各种微珠并且其中各种类型的微珠群体清楚的珠集的制作微珠的方法。

技术解决方案

为了解决上述问题，本发明提供一种制作微珠的方法，其包括以下步骤：在基板上形成用亲水性有机材料制成的亲水层，在所述亲水层上层积能够作为微珠剥离的薄膜，通过光刻胶法将薄膜形成为给定形状，在成形后的薄膜上固相化给定类型的物质，以及将所述物质固相化的、成形后的薄膜从所述基板连同至少一部分所述亲水层剥离而获得微珠。根据这种微珠的制作方法，通过设计在光刻胶法中使用的光掩模形状，能够各自以任意数量制作具有任意的多形态的微珠。