[发明专利]酵母中提高的异源Fe-S酶活性

权利要求书

1.包含至少一种异源Fe-S簇蛋白质的重组酵母宿主细胞，其中所述酵母宿主中至少一种内源Fe-S簇蛋白质的表达降低。

2.权利要求1的重组酵母细胞，其在编码所述至少一种内源Fe-S簇蛋白质的基因中包含破坏。

3.权利要求1的重组酵母宿主细胞，其中所述内源Fe-S簇蛋白质选自二羟酸脱水酶、异丙基苹果酸脱水酶、亚硫酸盐还原酶、谷氨酸脱氢酶、生物素合酶、乌头酸酶、同型乌头酸酶、硫辛酸合酶、成熟铁氧化还原蛋白、NADH泛醌氧化还原酶、琥珀酸脱氢酶、泛醌醇-细胞色素-c还原酶、ABC蛋白Rli1、核苷三磷酸酶Nbp35和氢化酶样蛋白质。

4.权利要求1的重组酵母宿主细胞，其中所述酵母选自糖酵母属(Saccharomyces)、裂殖糖酵母属(Schizosaccharomyces)、汉逊酵母属(Hansenula)、假丝酵母属(Candida)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、耶氏酵母属(Yarrowia)和毕赤酵母属(Pichia)。

5.权利要求1的重组酵母宿主细胞，其中所述内源Fe-S蛋白质在线粒体中表达。

6.权利要求1的重组酵母宿主细胞，其中所述内源Fe-S簇蛋白质具有选自下列的活性：二羟酸脱水酶和异丙基苹果酸脱水酶活性。

7.权利要求6的重组酵母宿主细胞，其中所述宿主细胞为糖酵母属，其表达编码具有如SEQ ID NO：114所示氨基酸序列的多肽的基因。

8.权利要求1的重组酵母宿主细胞，其中所述至少一种异源Fe-S簇蛋白质选自真菌的2Fe-2S二羟酸脱水酶和植物的2Fe-2S二羟酸脱水酶。

9.权利要求8的重组酵母宿主细胞，其中所述异源的真菌或植物2Fe-2S簇二羟酸脱水酶在胞质溶胶中表达。

10.权利要求8的重组酵母宿主细胞，其中所述异源的真菌或植物2Fe-2S簇二羟酸脱水酶是具有以＜10^-5的E值与表9的序型隐蔽马尔科夫模型匹配的氨基酸序列的多肽，其中所述多肽还包含全部三个保守的半胱氨酸，所述保守的半胱氨酸对应于变异链球菌(Streptococcus mutans)DHAD酶的氨基酸序列中的56、129和201位，所述DHAD酶氨基酸序列对应于SEQ ID NO：179。

11.权利要求8的重组酵母宿主细胞，其中所述异源的真菌或植物2Fe-2S簇二羟酸脱水酶是多肽，所述多肽具有与选自下列的氨基酸序列有至少约95％序列同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO 46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150和152。

12.权利要求8的重组酵母宿主细胞，其中所述异源的真菌或植物2Fe-2S簇二羟酸脱水酶是多肽，所述多肽具有采用Clustal W比对方法与SEQ ID NO：114有至少约90％同一性的氨基酸序列，其中所述比对采用空位罚分＝10、空位长度罚分＝0.1的默认参数和蛋白质序列全长上的Gonnet 250系列蛋白质权重矩阵。

13.权利要求10至12中任一项的重组宿主细胞，其中所述细胞包含异丁醇生物合成途径。

14.权利要求13的重组宿主细胞，其中所述细胞生产异丁醇。

15.用于生产异丁醇的方法，所述方法包括使权利要求14的重组酵母宿主细胞在产生异丁醇的条件下生长。

16.权利要求1的重组酵母宿主细胞，其中所述至少一种异源Fe-S簇蛋白质具有Fe-S丙二醇脱水酶再激活酶活性。