[发明专利]缺血性组织的细胞疗法

说明书

政府权利声明

本发明是根据由国家神经性疾病和脑卒中研究所授予的合同No.RO1NS52839，在政府支持下进行的。政府对本发明具有权利。

技术领域

本发明涉及采用由血液分离的单核细胞治疗缺血性病症和疾病(特别是心肌、脑部和肢体缺血)的领域。本发明涉及基于单核细胞谱系细胞富集的治疗性细胞群的治疗手段、组合物以及它们的制备方法。本发明还涉及采用上述治疗手段和组合物治疗或防止缺血症或以其他方式促进组织血流灌注和侧支血管形成的增强的方法。在一个方面中，采用单核细胞谱系细胞富集的单核细胞群来治疗心脏缺血和心绞痛。在另一个方面中，疾病为脑卒中，并且单核细胞是由人脐带血(HUCB)分离的。

背景技术

心绞痛是由流向心肌的血液不足而引起的胸部疼痛或不适。在美国20岁以上的成年人中，心绞痛的患病数为9,100,000例。稳定型心绞痛为在强体力活动后或对象处于情绪压力时可以预计发生的心绞痛。稳定型绞痛在美国45岁以上的成年人中的患病数(不包括相对应的心肌梗塞)为500,000例。参见Rosamond等Circulation 117(4)：e25(2008)。

目前的疗法包括：阿司匹林；β阻断剂(例如，卡维地洛、心得安、阿替洛尔)；硝酸甘油(用于急性病缓解)；血管扩张剂，如钙通道阻断剂(例如，硝苯地平(心痛定)和阿洛地平)；单硝酸异山梨酯和尼可地尔；I_f通道抑制剂(例如，伊伐布雷定)、ACE抑制剂、斯达汀和雷诺嗪(Ranexa)。然而，这些疗法通常仅治疗疼痛，而不防止疼痛复发，并且并不是所有患者都对这种治疗方式有反应。目前正采用CD34干细胞进行临床试验以治疗难治愈性心绞痛，其目的是采用干细胞生成新的血管，从而防止疼痛复发。然而，这种治疗方式尚未证实是安全、有效的。因此，需要心绞痛(特别是难治愈性心绞痛)的长期治疗方案。

治疗患有难治愈性心绞痛的患者是复杂的，并且需要多学科方法。目前的疗法包括：阿司匹林；β阻断剂(例如，卡维地洛、心得安、阿替洛尔)；硝酸甘油(用于急性病缓解)；血管扩张剂，如钙通道阻断剂(例如，硝苯地平(心痛定)和阿洛地平)；单硝酸异山梨酯和尼可地尔；If通道抑制剂(例如，伊伐布雷定)、ACE抑制剂、斯达汀和雷诺嗪(Ranexa)。此外，这些疗法通常涉及穷举式用药法，其尝试多种不同的用药方案以及组合，以减轻疼痛。然而，这些疗法通常仅治疗疼痛，而不防止疼痛复发，并且并不是所有患者都对这种治疗方式有反应。

除了药物疗法以外，还可以用介入方法治疗心绞痛，所述介入方法例如为经皮腔内冠状动脉成形术或冠状动脉旁路搭桥(CABG)手术，但是这些疗法由于多种因素而不能用于一些心绞痛患者，所述因素例如为不利的管状解剖床、冠状动脉较薄、近端或扩散冠状病变等。美国心脏协会2002对于可供选用的其他疗法的指南中的建议包括手术激光经心肌血管再生术(IIa类)、增强体外反搏术和脊髓刺激(IIb类)。

新的治疗方式正在研究之中，包括使用干细胞群。多个研究人员对于证明在心肌梗塞的情况下使用含有骨髓单核干细胞的部分使心脏组织再生方面已经迈出了第一步。这些研究已经观察到：(i)梗塞后心肌层的再生；(ii)减小了梗塞大小；以及(iii)通过人骨髓细胞使得心脏蛋白重新表达。通过对这些预先研究的随访，几个小组已经证明了得自骨髓的间质细胞在不同的试验模型中的再生潜力，其结果主要基于它们的肌源性潜力和血管源潜力。

已经开展了临床试验(主要是对急性心肌梗塞患者和经冠状动脉内输送干细胞)来研究自体细胞移植对于增强心脏修复的安全性和效力。然而，这些试验产生了相互抵触的结果，而没有得到在研究设计与细胞群或输送之间具有差异的明显依据。

对于缺血性心脏组织，一些临床试验已经至少证实了得自骨髓的单核胞的安全性，其中有效程度不一。在这些研究中，最主要的输注技术是经心肌内输注干细胞-经心内膜输注或经心外膜输注。

在难治愈性心绞痛情况下，一些小组已近主要采用骨髓单核细胞(BMMC)进行了临床试验，这些试验主要采用BMMC单独治疗或者与CABG结合进行治疗。

例如，Hamano等通过经心外膜方法将BMMC与CABG结合注入到具有相关缺血性心肌症的5个“无选择”患者中。结果表明，在三个患者中注射区域的心肌血流灌注发生客观增加。然而，该研究受困于伴随CABG的效果，而BMMC的治疗效果仍然不清楚。