[发明专利]检测核酸

权利要求书

1.一种评估样品中的目标核酸的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)使所述样品与探针核酸接触，所述探针核酸包含扩增性限制性内切核酸酶和在下述条件下与所述目标核酸的序列互补的核苷酸序列：如果所述目标核酸存在于所述样品中，所述目标核酸的至少一部分与所述探针核酸的至少一部分杂交，形成含有限制性内切核酸酶切割位点的核酸的双链部分，

(b)使所述核酸的双链部分与识别性限制性内切核酸酶接触，所述限制性内切核酸酶能在下述条件下在所述限制性内切核酸酶酶切位点处切开所述核酸的双链部分：所述识别性限制性内切核酸酶在所述限制性内切核酸酶酶切位点切开所述核酸的双链部分，从而使所述探针核酸中含有所述扩增性限制性内切核酸酶的部分与所述探针核酸的至少另一部分分离；

(c)使所述探针核酸中含有所述扩增性限制性内切核酸酶的所述部分与含有核酸双链部分的报道核酸接触，所述核酸双链部分含有所述扩增性限制性内切核酸酶的限制性内切核酸酶酶切位点，所述接触的条件是其中所述扩增性限制性内切核酸酶在所述扩增性限制性内切核酸酶的所述限制性内切核酸酶酶切位点切开所述报道核酸，从而使所述报道核酸的一部分与所述报道核酸的至少另一部分分离，和

(d)确定所述报道核酸所述部分的存在与否，其中所述报道核酸的所述部分的存在表明所述样品含有所述目标核酸，其中所述报道核酸的所述部分不存在表明所述样品不含所述目标核酸。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述探针核酸是单链探针核酸。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述探针核酸结合在固相载体上。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述探针核酸直接结合在固相载体上。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述探针核酸中包含所述扩增性限制性内切核酸酶的所述部分通过所述步骤(b)从所述固相载体上释放。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)和步骤(b)是在同一区室中进行的。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)和步骤(b)是在第一区室中进行的，所述步骤(c)是在第二区室中进行的。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)和步骤(b)是通过将所述样品加到含有所述探针核酸和所述识别性限制性内切核酸酶的区室中进行的。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述探针核酸包含(i)单链部分，所述单链部分含有与所述目标核酸的所述序列互补的所述核苷酸序列，以及(ii)双链部分。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述探针核酸包含第一核酸链，所述第一核酸链含有与所述目标核酸的所述序列互补的所述核苷酸序列，与含有所述扩增性限制性内切核酸酶的第二核酸链杂交。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述第一核酸链结合在固相载体上。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述第一核酸链直接结合在固相载体上。

13.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述第二核酸链的一部分与所述第一核酸链杂交，形成所述双链部分。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，包含所述扩增性限制性内切核酸酶的所述探针核酸的所述部分与所述探针核酸的所述至少另一部分在步骤(b)中分离，所述探针核酸的所述部分包含所述第一核酸链的一部分和全部所述第二链。

15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，包含所述扩增性限制性内切核酸酶的所述探针核酸的所述部分与所述探针核酸的所述至少另一部分在步骤(b)中分离，所述探针核酸的所述部分包含所述目标核酸的至少一部分。

16.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括在所述步骤(a)中使用多个所述探针核酸。

17.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括在所述步骤(c)中使用多个所述报道核酸。

18.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(c)中的所述报道核酸相对于来自所述步骤(b)的含有所述扩增性限制性内切核酸酶的所述探针核酸的所述部分摩尔过量。