[发明专利]检测核酸

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2008年8月15日提交的美国临时申请序列号61/089,392和2009年4月6日提交的美国临时申请序列号61/166,843的优先权。在先申请的公开内容被认为是本申请的一部分，并在此引入以供参考。

背景技术

1.技术领域

本申请涉及与检测核酸有关的方法和材料。例如，本申请涉及与用限制性内切核酸酶的酶促扩增级联检测核酸有关的方法和材料。

2.背景技术

聚合酶链式反应(PCR)是一种常用的扩增和检测核酸的技术。例如，实时PCR可用于扩增和检测样品中的少量模板DNA。通常PCR涉及向认为含有待扩增目标核酸的样品中加入一对核酸引物和热稳定DNA聚合酶，例如Taq聚合酶。使含有引物对和聚合酶的样品经历热循环启动链式反应，其中位于引物之间的目标核酸模板指数扩增。可用凝胶电泳等技术检测扩增的模板是否存在，或扩增的模板量可以采用涉及使用荧光标记探针的技术评估。

发明内容

本申请提供了检测目标核酸的方法和材料。例如，本申请提供了检测样品中目标核酸存在与否的方法和材料，检测样品中目标核酸量的方法和材料，检测样品中目标核酸存在与否的试剂盒，检测样品中存在的目标核酸量的试剂盒，以及制备该试剂盒的方法。总的说，本文提供的方法和材料可包括进行如本文所述的限制性内切核酸酶的酶促扩增级联，以迅速、低廉、灵敏、特异的方式检测目标核酸。在一些情况下，本文提供的方法和材料能够补充或代替目前基于PCR的核酸检测方法。

本文提供的方法和材料能够让临床人员、专业医生、实验室人员、和研究人员检测任何类型的目标核酸。例如，本文提供的方法和材料能够用于基因定型应用，以检测核酸突变(例如单核苷酸多态性(SNP))、基因组重组和基因组表观遗传事件(例如DNA甲基化事件)，可用于诊断和预后应用，以检测病毒或微生物(例如细菌、真菌、和原生动物)，可用于基因表达应用，以检测特定细胞类型中的mRNA水平，还可用于法医学应用，以比较样品之间的一致性或评估样品来源。在一些情况下，本文提供的方法和材料可被医学/生物技术专业以外的人用于检测目标核酸。例如，本文提供的检测细菌(例如大肠杆菌)的试剂盒可以设计用作家用检测试剂盒，从而让使用者能够检测其获得的生物学样品(例如血样、黏液样品、或唾液样品)中大肠杆菌核酸的存在与否