[发明专利]从脂肪组织获得细胞群的方法

权利要求书

1.一种从脂肪组织获得细胞群的方法，所述方法包含将脂肪组织在包含浓度为至少约200U/ml溶液并且不超过约319U/ml溶液的酶的溶液中温育约30至60分钟之间的时间段，由此从脂肪组织获得细胞群。

2.权利要求1的方法，其中酶浓度在约200至约300U/ml溶液之间。

3.权利要求2的方法，其中酶浓度在约225至约275U/ml溶液之间。

4.权利要求3的方法，其中酶浓度在约245至255U/ml溶液之间。

5.权利要求1到4任一项的方法，其中时间段在约45至约55分钟之间。

6.前述权利要求任一项的方法，其中酶是胶原酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶或包含至少一种上述的酶的混合物。

7.前述权利要求任一项的方法，其中脂肪组织体积与酶溶液体积的比为约1∶1。

8.前述权利要求任一项的方法，其中从每ml脂肪组织获得至少6.0x 10⁵个细胞。

9.权利要求8的方法，其中从每ml脂肪组织获得至少8.0x 10⁵个细胞。

10.一种从脂肪组织获得靶细胞富集群的方法，所述方法包含：

a.根据权利要求1到9任一项的方法从脂肪组织获得细胞群；以及

b.将细胞群与第一抗体温育，所述第一抗体将细胞群分成包含靶细胞的亚群和基本上不含靶细胞的亚群，由此获得靶细胞富集群。

11.权利要求10的方法，其中第一抗体是特异性针对靶细胞不表达的细胞标志物的抗体。

12.权利要求11的方法，其中第一抗体是特异性针对选自下列的细胞标志物的抗体：CD45、血型糖蛋白-A和CD31。

13.权利要求10的方法，其中第一抗体是特异性针对靶细胞所表达的细胞标志物的抗体。

14.权利要求13的方法，其中细胞标志物是CD34。

15.权利要求14的方法，其中靶细胞是CD34阳性细胞。

16.权利要求10到15的方法，其包含将细胞群与珠子温育，由此形成包含珠子和第一抗体的复合物。

17.权利要求16的方法，其中珠子包含与第一抗体结合的蛋白。

18.权利要求17的方法，其中蛋白选自：(i)与第一抗体特异性结合的第二抗体，或其抗原结合片段，(ii)蛋白A，(iii)蛋白G和(iv)它们的组合。

19.权利要求16到18任一项的方法，其中珠子以1∶1至5∶1之间的珠子与靶细胞的比存在。

20.权利要求19的方法，其中珠子与靶细胞的比为约4∶1。

21.权利要求16至20任一项的方法，其包含从细胞群中除去复合物。

22.权利要求21的方法，其中珠子是顺磁性珠子，并且使用磁体从细胞群中除去复合物。

23.权利要求16到22任一项的方法，其包含将复合物与释放肽温育。

24.权利要求23的方法，其中释放肽包含CD34的表位或第一抗体的表位。

25.权利要求23或24的方法，其中释放肽是CD34的可溶性片段或PR34释放肽。

26.权利要求23到25任一项的方法，其还包含捣碎复合物。

27.权利要求1到26任一项的方法，其中获得的群被培养或铺板少于一天。

28.权利要求1到26任一项的方法，其不含任何扩增所获群的步骤。

29.根据权利要求10到28任一项的方法从脂肪组织获得的靶细胞富集群。

30.权利要求29的富集群，其中富集群中靶细胞的百分率是从步骤(a)获得的细胞群中靶细胞的百分率的约1.5倍至约5倍。

31.权利要求29或30的富集群，其中靶细胞是CD34阳性细胞。