[发明专利]多层的血液产品

说明书

技术领域

本发明涉及多层的血液产品、制备所述血液产品的方法、可通过所述方法获得的血液产品以及血液产品制备容器装置。

背景技术

人类凝血系统能够止血和启动愈合。该系统的功能是公知的，被广泛地研究。然而，凝血产物在启动愈合方面的重要性仅在近年来被认识到。

血液制品，例如，血纤蛋白密封剂和血小板浓缩物通过从抗凝固的全血中分离富含血小板的血浆（PRP）来生产。血小板和血浆的存在部分地模拟了凝血酶激活时的天然的人类凝结系统。这产生了在血纤蛋白基质中生长促进因子的含血小板的自体浓缩物。这样的组合物可以用于覆盖伤口表面，并声称能启动愈合。

David M. Dohan等人的Platelet-rich fibrin（PRF）: A second-generation platelet concentrate. Part I: Technological concepts and evolution, Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2006;101:E37-44描述了如何不添加任何添加剂或试剂从全血制备富含血小板的固体血纤蛋白网络。PRF方案是：  在10 mL玻璃管或玻璃包被的塑料中不使用抗凝血剂采集血液样品，立即在大约400 g离心10分钟。抗凝血剂的缺乏意味着血液样品的大多数血小板在与玻璃管壁接触几分钟内激活并释放凝结级联物。纤维蛋白原首先在试管的高部浓缩，之后循环的凝血酶将它转变为血纤蛋白。然后在试管的中部获得血纤蛋白块，从试管底部的红细胞的上部伸出到顶部的非细胞血浆中。血小板在血纤蛋白网眼中大规模地截留。这种技术的成功完全取决于血液采集和转移到离心机的速度。实际上，在没有抗凝血剂时，血液样品在与试管玻璃接触时几乎立即开始凝固，其花费最少几分钟的离心来将纤维蛋白原浓缩在试管的中部和上部。快速操作是获得临床上可用的PRF血块的唯一方式。如果采集血液和启动离心所需的时间过长，将产生失败：血纤蛋白将以弥散的方式在试管中聚合，将仅获得没有稠密性的小的血块。总之，PRF方案使得采集填充了血清和血小板的血纤蛋白块成为可能。通过从试管中取出血块，人工地切割红细胞部分，人工地逐出血纤蛋白基质中截留的流体（血清），医师将获得自体的血纤蛋白膜。

然而这种血纤蛋白网络包括含有红血细胞的实质部分的红色血栓，其必需人工地切除。此外，产生的血纤蛋白网络的成分，例如，血纤蛋白、白细胞和血小板，是任意分布的并且包埋在产品内部。没有描述在使用低g力下的白细胞回收，白细胞的回收是低的，因为某些白细胞将位于红细胞部分中。血纤蛋白内细胞的陷网导致这些细胞的缺乏或缓慢的释放，从而抑制被包括的白细胞的接触依赖性抗杀微生物潜力。

Dohan等人的“Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2006;101:E37-44 and 2006;101:E45-50”描述了一种网络，其不是一定形状和结构的血小板浓缩物，其直接适合于覆盖伤口表面。为了获得可用于覆盖伤口表面的形状和形式/刚性和防止红血细胞包含，已知的富血小板固体血纤蛋白网络将必需人工地重塑和压缩。此外，所述方法包括几个步骤，不能在一个封闭的系统中制备，因而不便于临床使用。

Sutton等人的“Cell separation in the buffy coat. Biorheology. 1988;25（4）:663-73”描述了抗凝固全血将如何在离心或被动沉降时分离成几个层；红血细胞、白细胞和血小板（= 暗黄覆盖层）和血浆。进一步的，通过使用10000 g的离心力10分钟和利用1.053的密度漂浮，暗黄覆盖层可以通过戊二醛固定，以及取出用于研究；然而，这由于戊二醛的毒性而不能临床上使用。现有的从抗凝固的血提取暗黄覆盖层的几种方法包括利用密度限定的物质（即，Lymphoprep）。除了抗凝固的血的需要之外，提取的细胞将在血浆中悬浮和混合（打乱），血浆将不可避免地被包括。

EP 1637145A 描述了通过薄片状多孔膜从悬浮液过滤细胞的方法（例如，包括血小板和白细胞的血细胞），将细胞保留在所描述的膜中。薄片状多孔材料可以从血纤蛋白制备。然而，不能获得分层的结构，细胞在多孔材料的深部截留，同种异体的血纤蛋白的使用提高了与其他人交叉感染的风险。此外，所述方法包括几个步骤，不能在一个封闭的系统中制备，因而不便于临床使用。