[发明专利]可用于检测汉赛巴尔通体的17-kDa多肽的重组片段和合成肽

说明书

相关申请的交叉引用

本申请根据35U.S.C.§1.119(e)要求于2008年8月22日申请的美国临时申请号61/189,802和于2009年5月5日申请的61/215,420的优先权权益，它们的全部公开内容通过引用并入于此。

技术领域

本发明总体上涉及用于检测哺乳动物包括人中的传染原的诊断测定领域。本文公开的具体实施方案包括17-kDa蛋白的新型重组片段和合成多肽，它们可用于汉赛巴尔通体(Bartonella henselae)的检测中。

背景技术

汉赛巴尔通体是猫抓病(CSD)的病原体(Bass等，1997；Branley等，1996；Chomel，2000)并且也可以导致免疫低下患者中的杆菌性血管瘤病(BA)(Arvand等，1998；Asharaf和Letha，2002；Birtles等，1991；Chomel，1996)。CSD常见于被受感染的家猫抓伤或咬伤的儿童和年轻人(Chomel，2000)并且其特征是发热和近卫淋巴结病(regional lymphadenopathy)。正常情况下，该病在约三(3)个月内自行消退。然而，在免疫低下患者中，巴尔通体感染经常表现为更加严重且威胁生命的疾患，包括BA、心内膜炎、脑病和肺病(Margileth和Baehren，1998；Regnery和Tappero，1995)。BA的特征是皮肤和皮下血管病变，其中细菌侵袭内皮细胞导致血管瘤。BA最初描述于感染人免疫缺陷病毒的患者中并且已经延伸至包括患有累及不同器官诸如骨、肝和脾的增生性血管病变的患者(Regnery和Tappero，1995)。

汉赛巴尔通体通过分子和血清学检测进行鉴定(Eskow等，2001)。通过PCR扩增对细菌基因进行分子鉴定仅适用于具有适当设备、专家和质量控制规程的实验室。PCR可用于早期感染期间的检测，其中细菌仍然存在于外周血流中。通过PCR的分子检测被推荐用于手术切除的感染的心脏瓣膜，但对于外周血样品不太灵敏，其原因是病原体生物可利用度低。

血清学目前是用于确定巴尔通体感染的最常用的诊断测试(Houpikian和Raoult，2002，2003；Sander等，2001)。通过培养对此难养生物(fastidiousorganism)进行细菌分离很困难，因为过长的孵育期导致低灵敏度，尤其对于接受抗生素治疗的患者(Agan和Dolan，2002；La Scola和Raoult，1999)。

免疫荧光测定(IFA)是用于检测汉赛巴尔通体接触的最常用的血清学测试。其是高度主观的测试，并且因此易于由那些执行测试的人作出错误的解释。在不同实验室中观察的差异性的灵敏度常常导致血清学结果解释的变化(Amerein等，1996；Bergmans等，1997；Fournier等，2002)。

缺少关于表征汉赛巴尔通体的抗原的信息已经极大地阻碍了开发用于检测汉赛巴尔通体的灵敏的和特异的测定。美国专利号5,736,347描述了17-kDa蛋白的鉴定(Anderson等，1995；Sweger等，2000)，所述蛋白代表汉赛巴尔通体中据信在人中诱发抗体应答的少数已表征的抗原之一。然而，‘347专利未能提供全长17-kDa蛋白的灵敏度和特异性。仅进行了PCR斑点印迹杂交和IFA检测测定，因此不能肯定地确定17-kDa蛋白可能是ELISA测定中的良好的检测抗原，尤其对于IgM。因此，17-kDa蛋白是否能够用作检测IgM应答的抗原远未明确，更不用说17-kDa蛋白上负责免疫原应答的一个或多个结构域。

因此，对于改进的用于检测汉赛巴尔通体的测定和方法一直存在需求。本发明解决了现有技术的不足之处并且提供了出人意料的发现，即17-kDa蛋白C-末端上的长度跨越～10个氨基酸的单个结构域，对于结合获自感染汉赛巴尔通体的患者的IFA血清阳性的血清中存在的抗体是必不可少的。

发明内容

本发明提供了可用于检测汉赛巴尔通体的汉赛巴尔通体的多肽片段。本发明提供了重组和合成多肽以及在检测对汉赛巴尔通体特异的抗体中使用它们的方法。所述多肽、方法和试剂盒可用于检测最近的和/或正在发生的汉赛巴尔通体感染，它们可以用于诊断猫抓病(CSD)。