[发明专利]核酸测序的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种测序目标多核苷酸的方法，其包括：

在测定区内提供灵敏检测纳米结构，所述纳米结构产生与测定区内纳米结构的性质相关的信号，其中所述纳米结构偶联到检测所述信号的设备；

在测定区内使引物与目标多核苷酸杂交，从而使所产生的引物-目标多核苷酸可操作地偶联到所述纳米结构；

在如下条件下向测定区内的引物-目标多核苷酸添加一种或多种核苷酸和聚合酶，所述条件是，当至少一种所添加的核苷酸与所述引物下游的目标多核苷酸上的碱基互补时，支持新生链的聚合；

在测定区内检测添加到新生链的至少一种核苷酸所特有的信号的变化。

2.权利要求1的方法，其中所述性质是电荷。

3.权利要求2的方法，其中所添加的核苷酸还包括电荷物质报道结构部分和接头，该电荷物质报道结构部分包括高电荷物质结构部分。

4.权利要求3的方法，其中所述电荷物质报道结构部分设定为是可除去的。

5.权利要求4的方法，其中所述电荷物质报道结构部分在检测到信号后从所添加的核苷酸中除去。

6.权利要求3的方法，其中所述电荷物质报道结构部分设定为不影响新生链通过聚合酶的聚合。

7.权利要求3的方法，其中所述电荷物质报道结构部分设定为从所述新生链突出从而达到所述灵敏检测纳米结构。

8.权利要求3的方法，其中所述高电荷物质结构部分包括芳香族的和/或脂肪族的骨架，所述骨架包括叔氨基、醇式羟基、酚式羟基、或其任何组合中的一种或多种。

9.权利要求3的方法，其中所述高电荷物质结构部分包括一种或多种下述基团或其衍生物：

10.权利要求3的方法，其中所述接头包括具有下述通式的分子：

H₂N-L-NH₂

其中L包括直链或支链，所述直链或支链包括烷基、烷氧基、或其组合。

11.权利要求10的方法，其中L包括直链，所述直链包括烷基、烷氧基、或其组合。

12.权利要求11的方法，其中所述直链中的碳原子数是1至100。

13.权利要求1的方法，其中所添加的核苷酸还在5′磷酸基处包括可断开的帽分子，从而阻止另一核苷酸的添加，直到所述可断开的帽被除去为止。

14.权利要求3的方法，其中所述接头结合到所添加的核苷酸的5′磷酸基，由此充当帽。

15.权利要求1的方法，其中多于一个核苷酸被添加到测定区，但是其中直至添加到新生链的前一个核苷酸所特有的信号被检测之后，后继的核苷酸才被添加到该新生链。

16.权利要求1的方法，其中所述引物-目标多核苷酸和所述纳米结构之间可操作的偶联包括将所述引物固定到所述灵敏检测纳米结构。

17.权利要求1的方法，其中所述引物-目标多核苷酸和所述纳米结构之间可操作的偶联包括将所述目标多核苷酸固定到所述灵敏检测纳米结构。

18.权利要求1的方法，其中使所述引物与所述目标多核苷酸杂交包括使所述引物与已经连接到所述目标多核苷酸5′末端的寡核苷酸杂交。

19.权利要求1的方法，其中所述灵敏检测纳米结构选自由以下各项组成的组：纳米线、纳米管、纳米间隙、纳米珠、纳米孔、场效应晶体管(FET)-型生物传感器、平面场效应晶体管和任何传导纳米结构。

20.权利要求1的方法，其中所述目标多核苷酸和所述引物包括选自由下述各项组成的组的分子：DNA、RNA、肽核酸(PNA)、吗啉代、锁定核酸(LNA)、乙二醇核酸(GNA)、苏糖核酸(TNA)、合成核苷酸聚合物、及其衍生物。

21.权利要求1的方法，其中所添加的核苷酸包括选自由下述各项组成的组的分子：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、肽核苷酸、吗啉代、锁定核苷酸、乙二醇核苷酸、苏糖核苷酸、合成核苷酸、及其衍生物。

22.权利要求1的方法，其中所述检测所述信号的设备选自由下述各项组成的组：压电检测、电化学检测、电磁检测、光检测、机械检测、声波检测和重量分析检测。