[发明专利]TNIK抑制剂及其应用

说明书

发明领域

本发明涉及使用Traf2-和Nck-相互作用激酶(TNIK)抑制剂治疗癌症患者的组合物和方法。更具体地，本发明涉及包含TNIK抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物，和用于向癌症患者施用TNIK抑制剂而进行治疗的方法，尤其是向诸如结直肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌或乳腺癌的实体癌患者施用。

本发明还涉及新的氨基噻唑衍生物。

发明背景

Wnt蛋白是一个分泌性糖蛋白的大家族，其活化信号转导途径以控制广泛多样的细胞过程，诸如决定细胞命运、增殖、迁移、和极性。Wnt蛋白能够通过几个途径进行信号传导，表征最好的是通过β-联蛋白(catenin)的规范途径(Wnt/β-联蛋白信号传导)。Wnt/β-联蛋白信号传导的反常经常见于许多人类癌症中，如结直肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌，等等。

已知TNIK是STE20家族激酶之一，其活化c-Jun N-末端激酶途径并调节细胞骨架。最近，在两种结直肠癌细胞系DLD1和HCT-116中TNIK被鉴定为用抗-TCF4共同免疫沉淀的70种蛋白之一(Shitashige M等，Gastroenterology(胃肠病学)2008，134：1961-71)。

下面是关于本发明的效用的评价方法的参考性描述，其涉及使用TNIK抑制剂治疗癌症患者的组合物和方法。尽管这些参考性描述记载在临时申请提交之后，这些还记载在由本发明人在临时申请提交之前提交并且在临时申请提交之后公开的WO 2009/104413中。下面用于本发明的效用的评价方法的细节记载在本发明的“实施例”之后的“参考方法”中。

关于本发明的效用的评价方法的参考性描述

超过80％的结直肠癌显示腺瘤性结肠息肉(APC)基因的突变，并且其余的一半在CTNNB1基因中也有突变，导致β-联蛋白的累积和Wnt信号传导的组成型激活。β-联蛋白通过与T细胞因子(TCF)/淋巴样细胞增强因子(LEF)家族DNA结合蛋白形成复合物并且通过反式激活它们的靶基因来发挥其致癌活性。TCF4是TCF/LEF家族成员，通常在结直肠癌细胞中表达并且参与结直肠的致癌作用。我们以前在两种结直肠癌细胞系(DLD1和HCT-116)中将TNIK鉴定为用抗-TCF4和抗β-联蛋白抗体共同免疫沉淀的70种蛋白之一(Shitashige M，等，Gastroenterology(胃肠病学)2008，134：1961-71)。DLD1具有APC基因中的截断突变并且丢失了另一个等位基因，HCT-116具有CTNNB1基因中的错义突变。在用抗-TCF4或抗β-联蛋白抗体的免疫沉淀中检测到TNIK，但用对照IgG则检测不到。相反，β-联蛋白和TCF4蛋白被抗TNIK抗体免疫沉淀，表明TCF4，β-联蛋白和TNIK蛋白在结直肠癌细胞中形成复合物。双杂交测定揭示TNIK与TCF4通过包含激酶结构域的氨基酸1-289相互作用。TCF4的氨基酸100-216是与TNIK相互作用所必不可少的。

TCF4蛋白被TNIK(WT，野生型)磷酸化，但不被TNIK的无催化活性的突变体磷酸化，所述突变体具有在激酶结构域的ATP结合袋中的保守赖氨酸54位残基的置换(K54R)。串联质谱法(MS/MS)揭示TCF4的丝氨酸154位残基被TNIK(WT)磷酸化。一贯地，丝氨酸154位残基被丙氨酸置换(S154A)消除了TNIK对TCF4的磷酸化。在用TNIK(WT)转染DLD1细胞后TCF4被磷酸化，但用TNIK(K54R)转染后不发生磷酸化。

TNIK的自磷酸化似乎对于其核易位和与TCF4的相互作用是必不可少的。用TNIK(WT)或无催化活性的TNIK(K54R)转染DLD1和HCT-116细胞，并通过免疫印迹和免疫荧光显微镜检查法来分析。我们发现TNIK(WT)诱导其自身的丝氨酸764位残基(TNIKpS764)的磷酸化(通过抗TNIKpS764)。磷酸化TNIK结合至核中，而K54R置换显著地抑制了TNIK的磷酸化和核易位，并且减少与TCF4相互作用的TNIK的量。内源性TNIK蛋白沿丝状细胞骨架分布，而磷酸化TNIK(TNIKpS764)主要在核中被检测到，并且与TCF4共定位。TNIKpS764在结直肠癌细胞中检测到，但在未转化的HEK293细胞中检测不到。