[发明专利]单重组体系及其使用方法

权利要求书

1.一种经修饰的痘病毒载体，其包含报告基因，所述报告基因位于用于同源重组的一对侧翼序列之间。

2.权利要求1所述的经修饰的痘病毒载体，其中，所述报告基因编码荧光蛋白。

3.权利要求1所述的经修饰的痘病毒载体，其还包含至少一个筛选组件，所述筛选组件位于用于同源重组的一对侧翼序列之间。

4.权利要求3所述的经修饰的痘病毒载体，其中，所述筛选组件包含筛选基因，所述筛选基因抑制或减缓痘病毒在寄主细胞中的复制、或对寄主细胞具有细胞毒性。

5.权利要求3所述的经修饰的痘病毒载体，其中所述报告基因和所述筛选组件位于用于同源重组的单一一对侧翼序列之间。

6.权利要求3所述的经修饰的痘病毒载体，其中所述报告基因和所述筛选组件位于用于同源重组的多于一对侧翼序列之间。

7.权利要求1-6所述的经修饰的痘病毒载体，其中所述痘病毒为痘苗病毒或经修饰的安卡拉痘苗病毒。

8.一种含有权利要求1-7所述的经修饰的痘病毒载体的细胞。

9.权利要求1-7所述的经修饰的痘病毒载体或权利要求8所述的细胞在产生重组痘病毒中的用途。

10.一种用于产生能够表达目的基因的重组痘病毒的方法，其包括：

(1)用权利要求1-7所述的经修饰的痘病毒载体感染许可性寄主细胞；以及

(2)用含有所述目的基因的质粒转染所述许可性寄主细胞，条件是允许所述载体和所述质粒之间发生同源重组，

从而制备得到重组痘病毒。

11.权利要求10所述的方法，其进一步包括以下步骤：

通过针对所述筛选组件的存在进行筛选，增强重组痘病毒的复制。

12.权利要求10-11所述的方法，其进一步包括以下步骤：

将含有重组痘病毒的许可性寄主细胞与含有所述的经修饰的痘病毒载体的许可性寄主细胞分离，其中所述经修饰的痘病毒载体未与含有所述目的基因的所述载体发生同源重组。

13.权利要求10-12所述的方法，其进一步包括以下步骤：

使用含有所述重组病毒的所述许可性寄主细胞，用于在之前未感染的许可性寄主细胞中进一步传代至少一次。

14.权利要求10-13所述的方法，其中，所述痘病毒为痘苗病毒或经修饰的安卡拉痘苗病毒。

15.一种包含通过权利要求10-14所述的方法产生的重组痘病毒的细胞。

16.权利要求10-14所述的方法或权利要求15所述的细胞在产生重组痘病毒中的用途。

17.一种通过使用权利要求10-14所述的方法或权利要求15所述的细胞所产生的重组痘病毒。

18.用作药物的权利要求1-7所述的经修饰的痘病毒、权利要求8或15所述的细胞、或根据权利要求17所述的重组痘病毒。

19.用作治疗性或预防性疫苗的权利要求1-7所述的经修饰的痘病毒、权利要求8或15所述的细胞、或根据权利要求17所述的重组痘病毒，所述治疗性或预防性疫苗用于治疗或预防下列疾病：癌症、流感、肝炎、艾滋病、流行性腮腺炎、狂犬病、脑炎、胃或十二指肠溃疡、疟疾、昏睡病、莱姆病、反应性关节炎、肺炎、麻风病、白喉、念珠菌病和/或弓形体病。

20.一种选自由以下序列所组成的组中的核酸或其互补序列：SEQ ID NOs.15-23、或具有至少40％序列同源性的其片段或其同源核酸，其中所述片段的长度为相应核酸的至少40％。