[发明专利]重组生产的干扰素的提纯无效
申请号: | 200980152243.4 | 申请日: | 2009-12-17 |
公开(公告)号: | CN102264761A | 公开(公告)日: | 2011-11-30 |
发明(设计)人: | X.杨;G.J.韦耶坎普 | 申请(专利权)人: | 先灵公司 |
主分类号: | C07K14/56 | 分类号: | C07K14/56 |
代理公司: | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人: | 万雪松;刘健 |
地址: | 美国新*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 重组 生产 干扰素 提纯 | ||
1. 在重组生产的IFN同工型的混合物中将干扰素(IFN)的氧化单体同工型与该IFN的一种或多种不需要的同工型分离的方法,该方法包括:
(a)提供在第一缓冲液中的IFN同工型的混合物;
(b)提供大于15厘米长并填充着用第一或第二缓冲液平衡的阴离子交换树脂的色谱柱;
(c)将缓冲的IFN溶液加载到该阴离子交换柱上;
(d)用洗涤溶液洗涤该加载后的柱;
(e)将该柱的1至10床体积的量的强洗脱溶液施加到该洗过的柱上,其中该强洗脱溶液包含10至30 mM的第一磷酸盐浓度并具有5.4至6.6的pH;
(f)对来自步骤(e)的柱施加该柱的2至20床体积的量的弱洗脱溶液,其中该弱洗脱溶液包含小于第一磷酸盐浓度的第二磷酸盐浓度并具有5.4至6.6的pH;和
(g)收集含有氧化IFN单体同工型的多个洗脱级分。
2. 权利要求1的方法,其中该阴离子交换树脂是二乙基氨基乙基阴离子交换树脂。
3. 权利要求2的方法,其中该阴离子交换树脂是DEAE Sepharose Fast Flow。
4. 权利要求1至3任一项的方法,其中该IFN是I型IFN。
5. 权利要求4的方法,其中该IFN是干扰素alpha (IFN-α)。
6. 权利要求5的方法,其中该IFN是IFN-α2且第一和第二缓冲液各自基本由10 mM Tris、0-40 mM NaCl构成并具有7.0至8.5的pH。
7. 权利要求6的方法,其中第一缓冲液基本由10 mM Tris、40 mM NaCl构成并具有8.0的pH,第二缓冲液基本由10 mM Tris构成并具有8.0的pH,洗涤溶液基本由10 mM Tris和14 mM NaCl构成并具有8.0的pH。
8. 权利要求6或7的方法,其中第一磷酸盐浓度为大约17.5 mM,第二磷酸盐浓度为大约5 mM至大约7 mM,且强和弱洗脱溶液各自具有5.85的pH。
9. 权利要求8的方法,其中该IFN是IFN-α2,强洗脱溶液基本由17.5 mM磷酸钠构成,弱洗脱溶液基本由5 mM磷酸钠构成。
10. 权利要求1至9任一项的方法,其中步骤(c)、(d)、(e)和(f)各自以0.5至2.5厘米/分钟的流速进行。
11. 权利要求1至9任一项的方法,其中步骤(c)和(d)各自以2厘米/分钟的流速进行,步骤(e)和(f)各自以1厘米/分钟的流速进行。
12. 权利要求11的方法,其中该IFN是IFN-α2b且IFN溶液中IFN-α2b同工型1的浓度为大约1.75毫克/毫升至大约5.25毫克/毫升。
13. 权利要求12的方法,其中IFN溶液中IFN-α2b同工型1的浓度为大约3.5毫克/毫升。
14. 权利要求12的方法,其中步骤(e)中施加的强洗脱溶液的量为6床体积,步骤(f)中施加的弱溶液的量为15床体积。
15. 权利要求1至14任一项的方法,其中步骤(g)中收集的各洗脱级分的体积为床体积的大约20%。
16. 权利要求1至15任一项的方法,其中该IFN是IFN-α2b且IFN溶液中大约3%至大约20%的同工型包含IFN-α2b同工型4。
17. 权利要求16的方法,其中IFN溶液中6%至10%的同工型包含IFN-α2b同工型4。
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