[发明专利]核酸纯化方法

权利要求书

1.从含核酸样品中纯化核酸的方法，所述方法至少具有以下步骤：

a.将含有核酸的样品与具有核酸结合基团的核酸结合相接触，所述核酸结合基团具有pKa值在9到12的至少一个可质子化基团；

b.在比至少一个所述可质子化基团的pKa值低至少一个pH单位的pH值(结合pH)下使所述核酸结合所述核酸结合相；

c.在高于所述结合pH值，但是比至少一个所述可质子化基团的pKa值低至少一个pH单位的pH值下洗脱所述核酸。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸结合基团结合于支持物。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述支持物和/或核酸结合基团具有官能基团，所述官能基团在洗脱pH值下促进核酸释放。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述官能基团是阳离子交换剂，特别是酸性基团，优选例如羧基。

5.如权利要求2至4中的任一项所述的方法，其特征在于，所述支持用核酸结合基团和稀释基团的混合物包被。

6.如权利要求1至5中一个或多个所述的方法，其特征在于，在具有至少一个以下特征的条件下实施结合：

a.在3到8的pH下实施结合；和/或

b.在4到7.5的pH下实施结合；和/或

c.在4.5到7的pH下实施结合；和/或

d.在5.5到7的pH下实施结合；和/或

e.在6.5到7的pH下实施结合；和/或

f.在小于1M、小于0.5M、小于0.25M或小于0.1M的盐浓度下实施结合。

7.如权利要求1到6中一个或多个所述的方法，其特征在于，在具有至少一个以下特征的条件下实施洗脱：

a.在7.5到10的pH下实施洗脱；和/或

b.在8到9的pH下实施洗脱；和/或

c.在8.2到8.8的pH下实施洗脱；和/或

d.在小于1M、小于0.5M、小于0.25M、小于0.1M、小于25mM、小于15mM或小于10mM的盐浓度下实施洗脱；和/或

e.使用选自下组的溶液实施洗脱：水、生物缓冲液和有机缓冲液。

8.如权利要求1到7中一个或多个所述的方法，其特征在于，在结合后、洗脱前实施洗涤步骤。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所用的洗涤溶液具有以下一个或多个特征：

a.使用水或低盐浓度水性溶液实施洗涤步骤；和/或

b.使用低盐浓度水性溶液，所述盐浓度低于400mM、低于200mM、低于100mM、低于50mM和/低于25mM。

10.如权利要求1到9中一个或多个所述的方法，其特征在于，所述核酸结合相是固相的或可溶于于水性溶液。

11.如权利要求1到10中一个或多个所述的方法，其特征在于，所述可质子化基团具有以下一个或多个特征：

a.所述可质子化基团是或具有离子交换剂；和/或

b.所述可质子化基团是氨基；和/或

c.所述可质子化基团是pKa为10到12的氨基；和/或

d.所述核酸结合基团中每个基团具有1到10个、优选2到8个、特别优选2到6个氨基；和/或

e.所述核酸结合基团选自精胺和/或亚精胺；和/或

f.所述可质子化基团为氨基且不与减少电子密度的基团结合。

12.具有核酸结合基团的核酸结合相在纯化核酸中的应用，所述核酸结合基团具有至少一个可质子化基团，所述可质子化基团的pKa为9到12，且洗脱pH被调整到高于结合pH，但是比至少一个可质子化基团地至少一个pH单位。