[发明专利]用于工程化细胞的组合物和方法

权利要求书

1.分离的核酸分子，其包含：(a)OriP位点，(b)编码EBNA1基因的DNA区段；(c)一个或多个att重组位点；和(d)编码至少一个可选择标志物的DNA区段。

2.权利要求1的分离的核酸分子，其中EBNA1的表达是组成型的。

3.权利要求2的分离的核酸分子，其中驱动EBNA1表达的组成型启动子选自天然EBNA1启动子、强病毒启动子、工程化的组成型启动子或组成型的谱系特异性或组织特异性启动子。

4.权利要求1的分离的核酸分子，其中EBNA1的表达是可诱导的。

5.权利要求4的分离的核酸分子，其中驱动EBNA1表达的可诱导启动子是可诱导的抗生素操纵子。

6.权利要求2或4的分离的核酸分子，其中将一个或多个表达盒导入所述分离的核酸分子中，导入一个或多个att重组位点中的至少一个，其中每个表达盒包含与想要表达的DNA序列可操作地连接的启动子。

7.权利要求6的分离的核酸分子，其中所述表达盒编码组织特异性基因、重编程基因或发育基因。

8.权利要求7的分离的核酸分子，其中重编程基因选自Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4；Oct3/4、Nanog、Lin28、SSEA1和TRA1-80。

9.权利要求6的分离的核酸分子，其中驱动表达盒的启动子是选自下列的类型：细胞特异性启动子、组织特性启动子、重编程基因启动子和发育基因启动子。

10.权利要求9的分离的核酸分子，其中驱动表达盒的启动子是哺乳动物来源的天然启动子。

11.权利要求6的分离的核酸分子，其中驱动表达盒的启动子是工程化的启动子。

12.权利要求9的分离的核酸分子，其中驱动表达盒的启动子是细胞特异性启动子。

13.权利要求9的分离的核酸分子，其中驱动表达盒的启动子是发育阶段特异性启动子。

14.权利要求12的分离的核酸分子，其中所述细胞是干细胞。

15.权利要求13的分离的核酸分子，其中所述发育阶段是生殖细胞、胚胎、祖细胞、胎儿、新生儿或干细胞阶段。

16.权利要求10的分离的核酸分子，其中所述哺乳动物是人类。

17.权利要求9的分离的核酸分子，其中所述重编程基因启动子选自Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4；Oct3/4、Nanog、Lin28、SSEA1和TRA1-80的启动子。

18.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述可选择标志物是荧光蛋白，赋予抗生素抗性的蛋白，或酶。

19.权利要求18的分离的核酸分子，其中所述可选择标志物是荧光蛋白。

20.权利要求19的分离的核酸分子，其中所述荧光蛋白选自绿色荧光蛋白(GFP)及其修饰的突变体、红色荧光蛋白(RFP)及其修饰的突变体等。

21.权利要求20的分离的核酸分子，其中所述荧光蛋白是GFP。

22.权利要求18的分离的核酸分子，其中所述可选择标志物是赋予抗生素抗性的蛋白。

23.权利要求22的分离的核酸分子，其中所述抗生素选自四环素、新霉素、灭瘟素、潮霉素、氨比西林和嘌呤霉素。

24.权利要求23的分离的核酸分子，其中所述抗生素是潮霉素。

25.分离的核酸分子，其包含：(a)全部或部分的病毒基因组；(b)OriP位点；(c)一个或多个att重组位点；(d)任选地，编码EBNA1基因的DNA区段；和(e)至少一个可选择标志物。

26.权利要求25的分离的核酸分子，其中所述编码EBNA1的DNA区段在同一核酸分子上。

27.权利要求25的分离的核酸分子，其中所述编码EBNA1的DNA区段在不同的第二分离的核酸分子上，所述第二分离的核酸分子进一步包含(a)全部或部分的病毒基因组；(b)OriP位点；(c)一个或多个att重组位点；和(d)至少一个可选择标志物。