[发明专利]用于制备人重组胰岛素的方法无效
| 申请号： | 200980154515.4 | 申请日： | 2009-06-16 |
| 公开（公告）号： | CN102282260A | 公开（公告）日： | 2011-12-14 |
| 发明（设计）人： | A·P·拉扎耶夫;V·R·鲁西夫;I·E·考斯特斯基;I·L·里索夫斯基;I·P·勒斯克 | 申请（专利权）人： | MAKO有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N15/17 | 分类号： | C12N15/17;C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 | 代理人： | 罗菊华 |
| 地址： | 乌克*** | 国省代码： | 乌克兰;UA |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 制备 重组 胰岛素 方法 | ||
1.生产重组人胰岛素的方法，所述方法是介由构建编码胰岛素原的重组质粒DNA，产生和培养产生杂合多肽的大肠杆菌菌株，分离和破碎细胞以及分离多肽，对其进行酶促转化，然后纯化和分离所需的产物，所述方法的特征在于，编码包含人胰岛素原的氨基酸序列的杂合多肽的重组质粒DNA片段为表达载体pIK8-胰岛素原、或pMUT12、或pISYN2、或pCIM61或pDIM07的一部分或与前述DNA插入物之一杂交并且在表达时编码人胰岛素原前体，从而编码包含人胰岛素原序列的杂合多肽并且作为pIK8-胰岛素原质粒的一部分的重组质粒DNA片段具有下列序列：
1.........ATGGGCAGCAGCCATCATCATCATCATCACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCAT
1..........M..G..S..S..H..H..H..H..H..H..S..S..G..L..V..P..R..G..S..H.
61........ATGCGCTTTGTGAACCAACACCTGTGCGGCTCACACCTGGTGGAAGCTCTCTACCTAGTG
21.........M..R..F..V..N..Q..H..L..C..G..S..H..L..V..E..A..L..Y..L..V..
121.......TGCGGGGAACGAGGCTTCTTCTACACACCCAAGACCCGCCGGGAGGCAGAGGACCTGCAG
41.........C..G..E..R..G..F..F..Y..T..P..K..T..R..R..E..A..E..D..L..Q..
181.......GTGGGGCAGGTGGAGCTGGGCGGGGGCCCTGGTGCAGGCAGCCTGCAGCCCTTGGCCCTG
61.........V..G..Q..V..E..L..G..G..G..P..G..A..G..S..L..Q..P..L..A..L..
241.......GAGGGGTCCCTGCAGAAGCGTGGCATTGTGGAACAATGCTGTACCAGCATCTGCTCCCTC
81.........E..G..S..L..Q..K..R..G..I..V..E..Q..C..C..T..S..I..C..S..L..
301.......TACCAGCTGGAGAACTACTGCAACTAG
101........Y..Q..L..E..N..Y..C..N..＊..
编码包含人胰岛素原序列的杂合多肽并且作为pMUT12质粒的一部分的重组质粒DNA片段具有下列序列：
1.........ATGGGCAGCAGCCATCATCATCATCATCACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCAT
1..........M..G..S..S..H..H..H..H..H..H..S..S..G..L..V..P..R..G..S..H.
61........ATGCGCTTTGTGAACCAACACCTGTGCGGCTCACACCTGGTGGAAGCTCTCTACCTAGTG
21.........M..R..F..V..N..Q..H..L..C..G..S..H..L..V..E..A..L..Y..L..V..
121.......TGCGGGGAACGAGGCTTCTTCTACACACCCAAGACCAAGCGTGGCATTGTGGAACAATGC
41.........C..G..E..R..G..F..F..Y..T..P..K..T..K..R..G..I..V..E..Q..C..
181.......TGTACCAGCATCTGCTCCCTCTACCAGCTGGAGAACTACTGCAACTAG
61.........C..T..S..T..C..S..L..Y..Q..L..E..N..Y..C..N..＊...
编码包含人胰岛素原序列的杂合多肽并且作为pISYN2质粒的一部分的重组质粒DNA片段具有下列序列：
1.........ATGGGCAGCAGCCATCATCATCATCATCACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCAT
1..........M..G..S..S..H..H..H..H..H..H..S..S..G..L..V..P..R..G..S..H.
61........ATGCGCTTTGTGAACCAGCATCTGTGTGGCAGCCACCTGGTGGAAGCGCTGTATTTAGTG
21.........M..R..F..V..N..Q..H..L..C..G..S..H..L..V..E..A..L..Y..L..V.
121.......TGCGGCGAGCGTGGCTTCTTTTATACCCCGAAAACCAAACGTGGCATTGTGGAACAGTGT
41.........C..G..E..R..G..F..F..Y..T..P..K..T..K..R..G..I..V..E..Q..C..
181.......TGCACCAGTATTTGTAGCCTGTATCAGCTGGAAAATTACTGCAACTAA
61.........C..T..S..I..C..S..L..Y..Q..L..E..N..Y..C..N..＊...
编码包含人胰岛素原序列的杂合多肽并且作为pCIM61质粒的一部分的重组质粒DNA片段具有下列序列：
1.........ATGCGAAAGAAGCGGAAGAAGAAGCGTTTTGTGAACCAGCATCTGTGTGGCAGCCACCTG
1..........M..R..K..K..R..K..K..K..R..F..V..N..Q..H..L..C..G..S..H..L.
61........GTGGAAGCGCTGTATTTAGTGTGCGGCGAGCGTGGCTTCTTTTATACCCCGAAAACCAAA
21.........V..E..A..L..Y..L..V..C..G..E..R..G..F..F..Y..T..P..K..T..K..
121.......CGTGGCATTGTGGAACAGTGTTGCACCAGTATTTGTAGCCTGTATCAGCTGGAAAATTAC
41.........R..G..I..V..E..Q..C..C..T..S..I..C..S..L..Y..Q..L..E..N..Y..
181.......TGCAACTAA
61.........C..N..＊..
编码包含人胰岛素原序列的杂合多肽并且作为pDIM07质粒的一部分的重组质粒DNA片段具有下列序列：
1.........ATGGATGAAGACGAGGATGAAGCACGCTTTGTGAACCAGCATCTGTGTGGCAGCCACCTG
1..........M..D..E..D..E..D..E..A..R..F..V..N..Q..H..L..C..G..S..H..L.
61........GTGGAAGCGCTGTATTTAGTGTGCGGCGAGCGTGGCTTCTTTTATACCCCGAAAACCAAA
21.........V..E..A..L..Y..L..V..C..G..E..R..G..F..F..Y..T..P..K..T..K..
121.......CGTGGCATTGTGGAACAGTGTTGCACCAGTATTTGTAGCCTGTATCAGCTGGAAAATTAC
41.........R..G..I..V..E..Q..C..C..T..S..I..C..S..L..Y..Q..L..E..N..Y..
181.......TGCAACTAA
61.........C..N..＊..
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