[发明专利]移植了人肝细胞的小鼠

说明书

技术领域

本发明涉及一种移植了人肝细胞的小鼠，在该小鼠中胸苷激酶基因保持在小鼠肝脏中且能进行表达，对该小鼠给予了鸟嘌呤核苷类似物和从人分离出的肝细胞。进而，本发明涉及一种NOG小鼠，所述NOG小鼠移植了人肝细胞，在该小鼠中尿激酶型纤溶酶原激活物因子基因保持在小鼠肝脏中且能进行表达，对该小鼠给予了从人分离出的肝细胞。并且，本发明涉及一种移植了人肝细胞的小鼠的制备方法，该制备方法包含如下步骤：对胸苷激酶基因保持在小鼠肝脏中且能进行表达的小鼠给予鸟嘌呤核苷类似物和从人分离出的肝细胞。本发明还涉及使用上述小鼠测定被测物质在血浆中的动态的方法、鉴定被测物质的代谢物的方法以及测定被测物质的代谢速度的方法。进而，涉及使上述小鼠感染肝指向性病原体而得到的小鼠模型、使用该小鼠模型筛选针对肝指向性病原体的药剂和疫苗的方法。

背景技术

迄今为止，一些研究小组制备出了保持人肝细胞的免疫耐受小鼠，所述免疫耐受小鼠用于解析人特异性肝炎病毒的感染、给予的药剂的代谢或人肝脏的增殖。这些小鼠是对免疫缺陷小鼠移植人肝细胞而得到的，尿激酶型纤溶酶原激活物因子(uPA)的转基因保持在小鼠肝脏中且能够进行表达。已知上述小鼠能够感染人特异性肝炎病毒(非专利文献1和2)。并且，已知来源于上述小鼠的肝细胞表达在人肝脏中发现的酶(非专利文献3)，由被测物质生成了人特异性代谢物(非专利文献4)。

已知即使为人肝细胞的置换率低为50％左右、人肝细胞移植后存活时间为50天左右的小鼠，也能够用于上述肝炎病毒感染试验等一定的目的(专利文献1和2)。另一方面，例如为了测定人的治疗用药剂在血浆中的动态或其代谢物，需要尽可能排除来源于宿主动物的肝细胞所产生的影响，因而寻求提高人肝细胞的置换率。但是，由于uPA转基因激活纤溶酶原，所以uPA转基因的表达对其自身、肝干细胞引起持续性且进行性的损伤，所述纤溶酶原调节对肝细胞增殖重要的基质金属蛋白酶的活性。因此，uPA转基因的纯合子的胚胎致死率高达30％，并且，认为肝细胞的移植时期也限制在5～17日龄(专利文献1)，并且由于在进行了杂合子的系统的维持后得到的纯合子不至于致死，所以需要进行大鼠肝细胞移植等处置(专利文献2)，其系统维持需要繁杂的作业，同时制备出具有所期望的特性的小鼠的频率也极低。另外，已知肾损伤及低繁殖率等副作用多。因此，作为促进宿主成长、提高人肝细胞的置换率的尝试，已经进行了下述尝试：对宿主小鼠给予来自人补体的用于防御攻击的药剂(专利文献3)；给予人成长激素(专利文献4)。另外，还尝试着进行了如下实验：通过在人肝细胞移植前日给与除去与排斥反应相关的小鼠NK细胞的抗体、即抗单唾液酸神经节苷脂(Anti asialo GM1)抗体来提高人肝细胞的置换率。已知上述小鼠中的人肝细胞的置换率保持在70％左右。

最近，已经制备出以延胡索酰乙酰乙酸水解酶(Fah)基因敲除小鼠(Fah^-/-/Rag2^-/-/II2rg^-/-)(FRG小鼠)为宿主的嵌合体小鼠(非专利文献4)。但是，由于腺病毒自身没有物种特异性，所以认为其残存在小鼠中有可能导致对人肝细胞的损伤。事实上，FRG小鼠的人血清白蛋白的水平比基于FRG小鼠中人肝细胞的置换水平的期望值低，没有观察到人肝细胞特异性的药物代谢酶的一些基因以基于FRG小鼠中人肝细胞的置换水平所期待的水平进行表达(非专利文献5)。

专利文献1：国际公开第WO2001067854号说明书

专利文献2：国际公开第WO2001087059号说明书

专利文献3：国际公开第WO2003080821号说明书

专利文献4：国际公开第WO2007004547号说明书

非专利文献1：Dandri，M.et al.J.Hepatol.(2005)42，54-60

非专利文献2：Tateno，C.et al.Am.J.Pathol.(2004)165，901-912

非专利文献3：Katoh，M.et al.J.Pharm.Sci.(2007)96，428-437

非专利文献4：Azuma，H.et al.Nat.Biotechnol.(2007)25，903-910

非专利文献5：Shafritz，DA.et al.Nat.Biotechnol.(2007)25，871-872

非专利文献6：Sandgren，EP.et al.Cell(1991)66，245-256

发明内容