[发明专利]使用逆流分离从复杂混合物中纯化取代环戊-2-烯-1-酮同源物及取代1,3-环戊二酮同源物的方法

说明书

发明背景

相关申请的交叉引用

本专利申请是在2008年12月10日提交的美国临时专利申请60/121,419的非临时性申请，并要求该临时专利申请的优先权，该临时专利申请整体通过援引加入本文。

发明领域

本发明涉及逆流色谱纯化的领域；具体而言，本发明涉及纯化存在于合成混合物中或者可以从啤酒花中分离或源自啤酒花的取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮的单个同源物的方法。另外还公开了利用这些实质上纯的同源物的组合物。这些实质上纯的同源物是通过使用适合的不互溶的溶剂体系及逆流分离仪器获得的。

相关技术说明

最近已报道了异α酸(取代环戊-2-烯-1-酮)的同源物混合物在肥胖及血脂异常的鼠类模型中产生有益效果。除了这些报道外，属于不同族的异α酸(取代环戊-2-烯-1-酮)的还原异α酸(取代1，3-环戊二酮)的同源物混合物具有体外抗炎活性并在减低关节炎膝痛中具有经临床证实的有效性。为了测定不同异α酸同源物(取代环戊-2-烯-1-酮)以及属于还原异α酸族(取代环戊-2-烯-1-酮)的同源物在生物活性方面的差异，需要可以纯化这些同源物的有效分离方法。

最早经报道的纯化异α酸的同源物的方法依赖于如Rigby与Bethune所报道的Craig-Post逆流分布(CCD)装置(Rigby，F.L.和Bethune，J.L.(1952)Proc.Am.Soc.Brew.Chem.98-105)。在此报道中，纯化的异α酸同源物被称为“异葎草酮(isohumulone)”，并根据其与从被称为“葎草酮”的前体合成的对照样品相比的相同物理性质而得以鉴定。另外，被称为“异科葎草酮”的第二同源物被分离出来。使用类似于Rigby & Bethune，Verzele等人，(Verzele M.，Anteunis，M.和Alderweireldt F.，J.Inst.Brewing，(1965)，71，232)报道的CCD方法，报道纯化被称为“反式-异葎草酮”及“顺式-异葎草酮”的异α酸的两种新型同源物。已出版的报道使用CCD方法纯化异α酸或还原异α酸的多种同源物的其它实例及参考文献可见于Verzele与DeKeukeleire的重要著作(M.Verzele，D.DeKeukeleire，Chemistry and Analysis of Hop and Beer Bitter Acids.Elsevier：New York，1991；第27卷)。

Pauli等人综述了在逆流分离(CS)技术中的创新和进步(J.Nat.Prod.，2008，71(8)，第1489-1508页)。如Pauli等人的讨论并如图18所示，独特且新颖的CS设计的发展是CS领域中的显著且最新的进展。由于这些当代仪器的设计及操作的固有及基本的优点，原先由Rigby和Bethune以及Verzele等人所描述的前述CCD装置已经过时。根据Pauli等人，当代的CS仪器是根据一种或两种规范化设计原理，即流体静力学或流体动力学设计操作的。这两种设计彼此不同，并且与Verzele等人及其同时代使用的目前过时的CCD仪器相比，其具有根本上独特的设计以及固有地卓越的操作、效率及性能。

啤酒花已数十年用于将啤酒调味，并且与水、酵母及麦芽共同被认为是啤酒的基本成份。许多研究已证实源自啤酒花的还原异α酸可作为抗炎剂及膳食补品。最近的研究还证实还原异α酸的某些异构体可以比外消旋混合物在治疗上更为有效。

发明概述

需要一种有效率、精确且相对廉价的纯化取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮的异构体的方法。利用逆流分离的本发明还提供包含实质上纯的形式的这些同源物的组合物。

本发明的第一方面公开从同源物混合物中分离实质上纯的形式的同源物的方法，其包括以下步骤：

a.选择待分离的同源物；

b.将所述同源物混合物溶解在专门针对所选择的待分离的同源物的双相溶剂体系中，其中所述双相溶剂体系的分配系数是约0.5至5.0；

c.对溶解在所述双相溶剂体系中的所述同源物混合物进行逆流色谱法；以及

d.分离所选择的同源物；