[发明专利]诱导淀粉样前体蛋白裂解以形成新片段的方法

说明书

发明领域

本发明涉及调节淀粉样前体蛋白(APP)的加工，且特别地涉及诱导APP裂解以形成新蛋白片段。

发明背景

阿尔茨海默氏症(AD)是神经组织退化性疾病，对其仅存在对症治疗且具有有限的功效。某些APP的β-淀粉样(Aβ)片段，尤其是Aβ_1-40和Aβ_1-42涉及AD的病理学。已进行Aβ的减小作为修改AD过程的方法(Barten，D.和C.Albright，Mol.Neurobiol.37：171-186(1998))。然而，迄今为止，该方法没有产生经批准的疗法。

已尝试使用对Aβ的主被动免疫法来治疗AD。一种这样的免疫方法已经在人试验中失败(Holmes，C.等人，Lancet(柳叶刀)372：216-23(2008))。Aβ免疫疗法的局限性可能是其仅靶向已经形成的Aβ。其不减缓或停止产生新的Aβ，且实际上，甚至可能刺激增加产生新的Aβ。

治疗AD的其它尝试涉及在能够产生有害的Aβ片段之前，抑制APP加工中已知的酶。这些酶靶标为γ-分泌酶和β-分泌酶。由于许多这样的抑制剂影响其它γ-分泌酶底物的裂解且因此为有毒的，从而未证明γ-分泌酶抑制剂为有用的(Czirr，E.和S.Weggen，Neurodegenerative Dis.(神经组织退化性疾病)3：298-302(2006)；Tomita，T.，Nauyn-Schmiedegerg′s Arch.Pharmacol.377：295-300(2008))；Milano，J.等人，Toxicological Sciences(毒物科学)82：341-358(2004))。

还未证明γ-分泌酶调节剂为有用的。γ-分泌酶调节剂的实例包括非甾族消炎药(NSAIDs)，其为γ-分泌酶的别构调节剂。这样的化合物没有毒性，但已经进入临床试验的化合物仅具有高的微摩尔体外效力，从而其太弱而不具有足够的临床效果(Czirr，E.和S.Weggen，Neurodegenerative Dis.3：298-304(2006))。最近，原型γ-分泌酶调节剂氟比洛芬未通过第III阶段临床试验。

此外，未证实使用β-分泌酶抑制剂治疗AD的在先尝试为有用的，因为与其膜位置结合的β-分泌酶的大结合口袋对设计抑制剂产生了挑战，所述抑制剂以足够的有效浓度通过血-脑屏障(Barten，D.和C.Albright，Mol.Neurobiol 37：171-186(1998)；John，V.，Curr.Top.Med.Chem.(药物化学)6：569-78(2006)；Venugopal，C.等人，CNS & Neurological Disorders-Drug Targets(中枢神经系统&神经系统疾病-药物靶点)7：278-294(2008))。

因此，本领域仍存在有效治疗AD的需要。

发明概述

本发明提供了在诱导APP裂解从而制备约17千道尔顿(kDa)的APP羧基端片段中使用的通式(I)的杂环化合物或其药物可接受的盐、水合物或前药：

其中所述约17kDA的片段包含APP的羧基端氨基酸序列以及β-淀粉样氨基酸序列，且其中各个R_x、R₁、R₂、R₃、R₄如本文所定义。

本发明还提供了约17kDa的包含APP的羧基端氨基酸序列和β-淀粉样氨基酸序列的APP片段。

本发明还提供了用于筛选裂解APP以生成约17kDa的APP片段的化合物的方法，所述方法包括：(a)将制备APP或其片段的细胞暴露于试验化合物，以及(b)测定约17kDa片段的量，其中所述约17kDa片段包含APP的羧基端氨基酸序列以及β-淀粉样氨基酸序列，且其中相对于未暴露于所述化合物的细胞中的约17kDa片段的量，暴露于所述化合物的细胞中的约17kDA片段的量的增加表明所述化合物裂解APP以生成所述约17kDA片段。

本发明还提供了在诱导APP裂解以制备约17千道尔顿(kDa)的APP羧基端片段中使用的非通式(I)杂环化合物的化合物、或其药物可接受的盐、水合物或前药：

其中所述约17kDA片段包含APP的羧基端氨基酸序列以及β-淀粉样氨基酸序列，且其中各个R_x、R₁、R₂、R₃、R₄如本文所定义。