[发明专利]用于肺癌诊断、预后和提高生存率的方法与组合物

说明书

技术领域

本发明涉及基于microRNA(微RNA)表达的疾病的诊断方法(如肺癌)，确定疾病预后和改善患者生存。

背景技术

肺癌是世界导致癌症死亡的首要原因。相似的患者肺癌可能会有不同的临床结果，很难预测病人的预后。

虽然近年来对肺癌分子生物学的了解有所增加，但仍无法详细地了解潜在的分子机制。临床上需要有精确的预后指标以确定高风险患者，也需要针对性的设计最佳的治疗方法。

本文披露的所有出版物，专利，专利申请及专利申请公布已列入本文并作为参考文献。

发明内容

本发明是部分基于发现，特别癌组织样本中微RNA表达增加或减少的水平。因此，此处依据miRNAs与/或的地位相应的miRNA基因表达水平，提供的诊断癌症方法和成分，并确定癌症患者的预后(如肺癌)。本文还提供了用探针方法检测miRNA或相应的miRNA来基因诊断和预后判断的癌症(如肺癌)。

一方面，本文件阐述了一种方法，以确定一个人有肺癌，其中包括：a)肺组织样本miRNA表达水平，其中，个人组织是被怀疑是癌症，b)比较miRNA与参考品的表达水平，和c)如果样品展示至少有一个miRNA的有特征变化，判读个人具有或可能患有肺癌。肺癌可以是小细胞肺癌，肺腺癌，或肺鳞状细胞癌。至少一个的miRNA  可以是hsa-miR-210，hsa-miR-30a，hsa-miR-182，hsa-miR-486-5p，hsa-miR-140-3p，或者相应的同源性。该方法也可包括至少在三个miRNA有特征变化，其中，至少有三个微RNA均选自组成的hsa-miR-210，hsa-miR-30a，hsa-miR-182，hsa-miR-486-5p，hsa-miR-140-3p，或其相应的同源。如果样品中hsa-miR-210，hsa-miR-30a与hsa-miR-182表达增加和hsa-miR-486-5p，hsa-miR-140-3p表达降低，表明个人患有或可能造成肺癌。可以通过微阵列分析(例如，根据杂交信号的强度，或基于的杂交信号的比值)对来确定miRNA的表达水平。miRNA的表达水平也可以通过Northern blot分析，原位杂交，或定量逆转录聚合酶链反应来确定。检测miRNA来源于淋巴结样品，血液，血清，或呼吸道拭子。

在另一个方面，本文件阐述的一种方法，以确定一个人有肺癌。其中包括分析至少有一个miRNA的特征变化的水平，依次确定个人具有或可能有肺癌。通过miRNA的删除或扩增，或根据miRNA的基因拷贝数的变化来确定基因的变化。

在另一个方面，本文件采用了系统检测肺癌，其中包括至少一对引物或多个探针，其中每对引物，或每个探针能够检测不同的miRNA的样品中，和其中至少约百分之五十的引物和探针序列能够检测hsa-miR-210，hsa-miR-30a，hsa-miR-182，hsa-miR-486-5p，hsa-miR-140-3p，和其相应的同源miRNA。

在另一个方面，本文件阐述系统检测肺癌的方法，其中，系统包括至少一对引物或多个探针，其中每对引物，或每个探针能够检测不同的miRNA或基因的表达状态，在样本，其中至少有百分之五十左右的引物或探针能够检测的hsa-miR-210，hsa-miR-30a，hsa-miR-182，hsa-miR-486-5p，hsa-miR-140-3p，和其相应的同源miRNA。符合其中的一个miRNA的表达变化提示肺癌。

在另一个方面，本文件使用至少一对引物或多个探针构建制造系统来检测肺癌，其中每对引物，或每个探针能够检测不同的miRNA样品中，和其中至少有50％左右的引物或探针能够检测hsa-miR-210，hsa-miR-30a，hsa-miR-182，hsa-miR-486-5p，hsa-miR-140-3p，和其相应的同源miRNA。

该文件还使用一种方法诊断肺癌病人，通过肺癌患者miRNA的表达水平来诊断肺癌患者。该方法可包括：依据表1或表2的miRNA或同源基因，来确定肺癌分化级别。

在另一个方面，本文件阐述的方法确定肺鳞状细胞癌患者的预后生存，其中包括：a)检测肺癌组织样本至少一条miRNA的表达水平，b)比较样品中的miRNA与参考品的表达水平，和c)miRNA的表达水平与个体预后生存。在至miRNA指hsa-miR-31或相应的同源基因。