[发明专利]用于免疫治疗的HLA-B*0702共有表位的鉴定、优化与应用

说明书

本发明涉及肽的免疫治疗领域。特别地，本发明提供了基于代表肿瘤抗原共有表位的肽有效治疗具有HLA-B^*0702表型的患者的新方法和物质。

肽免疫接种或免疫治疗是目前在癌症预防和治疗领域受到极大关注的治疗方法。这种治疗方法的原理基于利用可再生肿瘤抗原T表位的肽进行免疫接种，所述肿瘤抗原可以被细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别，而细胞毒性T淋巴细胞对于表面表达有这些抗原的肿瘤细胞的清除具有重要作用。

应该理解，CTL识别的不是完整的蛋白抗原，而是由表达于不同细胞表面的主要组织相容性复合物(MHC)分子提呈的完整蛋白抗原的肽片段。这些肽片段构成了T表位。由I型主要组织相容性复合物(MHC I)分子提呈的肽通常具有8-11个氨基酸，并被代表细胞毒性应答的主要组分的CD8⁺T细胞识别。在抗原加工过程中发生肽选择，这种选择导致肽提呈的层级(hierarchy)。被MHC I分子优先提呈的肽被称为免疫显性肽，而被MHC I分子较弱提呈的肽则被称为隐蔽肽。免疫显性肽表现对MHC I的高亲和性且是免疫原性的，而隐蔽肽则表现对MHC I的低亲和性且是非免疫原性的。

肿瘤特异性表位的鉴定，特别是由较常见的MHC I等位基因提呈的那些肿瘤特异性表位(考虑到CD8⁺应答在细胞毒性中的重要作用)的鉴定，构成了抗肿瘤免疫治疗组合物开发的重要步骤。目前已知许多肿瘤抗原，已经鉴定出这些抗原的一些T表位，并且在许多案例中已经显示基于再生这些T表位的肽的疫苗的有效性(Menez-Jamet和Kosmatopoulos，2009)。

然而，大部分肿瘤抗原的表达都受限于肿瘤的某些组织学类型，从而限制了它们的临床使用。随着功能对维持致癌表型至关重要的抗原的鉴定，对广泛表达的“通用(universal)”肿瘤抗原的研究得以加强，并且正努力鉴定出由大部分患者表达的表位。

肽免疫治疗的另一主要限制来自某些患者中出现的肿瘤变体(逃逸变体)，所述变体不再表达由细胞毒性T淋巴细胞识别的抗原。

某些肿瘤抗原属于多基因家族：在相同家族中具有序列同源性，这可导致相同家族中的两个或多个成员存在共有表位。

通常，相同抗原家族的不同成员在不同的肿瘤类型中表达；这些抗原的共有表位的使用使具有广谱活性的抗肿瘤疫苗的获得成为可能。

另外，在许多情况中，相同家族的数种抗原在同一肿瘤系中共表达；由于所有这些抗原表达均丧失的概率极低，使用这些抗原的共有表位可避免逃逸变体的出现。

在已知属于多基因家族的肿瘤抗原中，特别要提及MAGE-A、HER、BAGE或GAGE家族的抗原。

MAGE-A是由位于X染色体的q28区的12个同源基因(MAGE-A1至A12)构成的多基因家族(De Plaen et al.，1994)。在该家族的成员中，MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、MAGE-A10以及MAGE-A12由肿瘤而非正常组织(除了睾丸和胎盘以外)强表达。

MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、MAGE-A10以及MAGE-A12抗原存在于组织学来源变化非常大的大量(广谱)肿瘤中，例如黑素瘤、肺癌、乳腺癌、头颈部肿瘤以及肉瘤、骨髓瘤等。

基于MAGE的癌疫苗，例如MAGE-A3抗原特异性癌免疫治疗剂(ASCI)(GlaxoSmithKline)当前处于开发后期，并且结果令人振奋。例如，该疫苗是基于与GSK专有佐剂系统联合作为重组蛋白提呈至患者免疫系统的肿瘤抗原，并且已经成功地完成了在黑素瘤和非小细胞肺癌中的两个临床试验。

各MAGE-A抗原的表达可随肿瘤不同而不同，但总体上，大部分肿瘤至少表达一种MAGE-A抗原。

尽管使用共有T表位具有潜在的优点，但该方法极少使用，原因是在抗原之间完全相同的合适大小(对于MHC I提呈的肽为至少8个氨基酸)的区域极少。

发明人先前描述了一种用于鉴定由HLA I类分子提呈且由同一多基因家族的数种抗原共有的肽表位的方法，该方法的特征在于如下步骤(EP1485719)：

a)比对所述抗原的序列，以在各抗原上鉴定出具有8至10个氨基酸的序列，该序列包含至少一个共有的五肽(pentapeptide)序列，在五肽序列之前有3个氨基酸位于N末端，且任选五肽序列之后有1个或2个氨基酸位于C末端；实际上，作者发现限定由所述肽的P4位延伸至P8位的5个氨基酸序列相同是足够的。