[发明专利]一种通过胚性细胞组织制备蛋白质的方法

权利要求书

1.一种制备蛋白质的方法，其特征在于，所述方法是通过将含有需要制备的蛋白质基因转化到植物胚性细胞中进行培养来制备蛋白质的。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)制备植物胚性细胞组织；

2)将需要制备的蛋白质基因转入步骤1)所制备的胚性细胞组织中；

3)培养步骤2)得到的胚性细胞组织，使其发育成熟为体细胞胚；

4)从步骤3)得到的体细胞胚中提取蛋白质。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中制备植物胚性细胞组织的方法包括采用半固体培养基诱导体细胞分化成胚性细胞和采用液体培养基增殖的步骤；优选地，所述培养基为添加了1～20μmol/L生长素和/或1～20μmol/L细胞分裂素的1/2Litvay培养基；更优选地，所述的培养条件为：20～30℃，黑暗，90-120转/分钟摇床培养。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中将需要制备的蛋白质基因转入胚性细胞的方法选自：微粒-介导传递技术、原生质电穿孔方法、聚乙二醇析出技术、直接基因转移技术、生物体外原生质转化技术、植物细胞原生质或胚性愈伤组织显微注射技术和土壤农杆菌转化方法。

5.根据权利要求2至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中培养步骤2)得到的胚性细胞组织的方法包括采用液体培养基悬浮培养的步骤；优选地，所述培养基为添加了生长抑制剂如5～120μmol/L脱落酸和/或渗压剂如蔗糖的1/2Litvay培养基；更优选地，所述的培养条件为：20～30℃，黑暗，60～120转/分钟摇床培养。

6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在超低温下冷冻保藏所述步骤1)中制备的胚性细胞组织或步骤2)中制备的转入蛋白质基因的胚性细胞组织的步骤；优选地，所述冷冻保藏温度为-196℃。

7.根据权利要求2至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中培养步骤2)得到的胚性细胞组织的方法还包括催化体细胞胚成熟的处理；优选地，所述处理是采用船式RAFT培养方法来实现的，船式RAFT培养方法中的培养基为添加了生长抑制剂如5～120μmol/L脱落酸和/或渗压剂如蔗糖的1/2Litvay培养基；更优选地，所述的培养条件为：20～30℃，黑暗，静置培养。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其特征在于，所述制备植物胚性细胞组织的外植体选自裸子植物或被子植物种子；优选地，所述裸子植物包括松科、柏科和杉科，如冷杉属、松属、云杉属、铁杉属、假铁杉属、金钟柏属、桧属、落叶松属、紫杉属和红杉属；所述被子植物包括油棕、刺葵属、桉树属、栎属、葡萄属、苹果属、小麦属、稻属、大豆属、燕麦属、芸薹属、甘蔗属、大麦属、荞麦属、棉属、甜菜属、落花生属、蛇麻籽属、番薯属、蕉麻芭蕉属、木薯、咖啡属、山茶属、蔷薇属、古柯属、大麻属、罂粟属、番木瓜属、椰子属、胡萝卜属、苜蓿属、玉米属、可可属、械属、桤木属、杨梅属、泡泡树属、桦木属、鹅耳枥属、山核桃属、栗属、朴属、紫荆属、扁柏属、山茱萸属、柳杉属、桉树属、水青冈属、白蜡树属、皂荚属、肥皂荚属、金缕梅属、胡桃属、鹅掌楸属、木莲属、苹果属、桑属、紫树属、铁木属、悬铃木属、杨属、李属、栎属、鼠李属、漆树属、柳属、接骨木属、檫木属、花楸属、椴树属、榆属以及荚蒾属；更优选地，所述制备植物胚性细胞系的外植体为白云杉种子的合子胚。

9.权利要求1至8中任一项所述的方法在制备蛋白质中的用途；优选地，所述蛋白质包括任何一种具有工业或药用价值的蛋白质或多肽，如单克隆抗体和疫苗等，包括重组人类生长素、人类生长素受体拮抗剂、胰岛素、干扰素、细胞因子等。

10.一种用于制备蛋白质的胚性细胞组织，其特征在于，所述胚性细胞组织为针叶类植物的胚性细胞组织；优选地，所述其胚性细胞组织是通过诱导白云杉种子的合子胚而形成。