[发明专利]一种复方骨肽冻干制剂

权利要求书

1.一种复方骨肽冻干制剂，包含骨肽和蝎肽，其中骨肽和蝎肽的质量比为3∶1，辅料为氯化钠；骨肽和蝎肽分别按以下方法制备得到：

骨肽： 

A：骨肽的提取、去脂、浓缩：取健康新鲜或冷冻猪的四肢骨，热压下抽提后过滤，骨渣抽提，过滤；合并两次滤液，立即置于冷室中静置，除去脂肪层，加热使冻状物融成液体，真空浓缩； 

B：沉淀、浓缩：取浓缩液，加入95％乙醇至终浓度为体积比70％，静置沉淀，滤除杂蛋白，得澄清液；再真空浓缩至总体积的1/4左右，除去乙醇，加入0.3％苯酚，补加蒸馏水至总体积； 

C：酸性、碱性沉淀：酸性沉淀：在搅拌下滴加盐酸，调PH，常压加热，离心除去酸性蛋白，然后滤液消毒1小时，放冰箱过夜；碱性沉淀：酸性沉淀产物放冰箱过夜后，次日取出，过滤，滤液在搅拌下加入碱溶液调pH8.5，加热后于冷室静置；次日离心，除去沉淀，得滤液；

D：中性沉淀：C步骤得到的滤液次日离心，除去沉淀，滤液用盐酸调pH到7.0～7.2，常压消毒1小时，冷室放置过夜；

E：吸附：将D步骤得到的溶液再次过滤，滤液加入活性炭，搅拌加热，离心，得滤液，调pH7.0～7.2，加热，同时补水，将骨肽含量控制在30-33mg/ml，放冰箱备用；

蝎肽的提取：

a：取全蝎，按中国药典2000版附录XA测定浸出物，合格后投料；

b：全蝎肽的提取：粉碎，三次提取，分别在沸水浴中回流三次，合并提取液； 

c：真空浓缩，回收乙醇：加提取液等量的蒸馏水，真空浓缩；

d：浓缩液用盐酸调pH后加热灭菌，同时补水至总体积，冷却后过滤；

e：脱脂：将上述滤液用纸浆或滤纸过滤，除去油层，取滤液；

f：调pH：将上述滤液用碱调pH6.8；

g：除热原：将上述溶液，加入活性炭，搅拌加热煮沸2hr，并用蒸馏水补充所需含量，过滤到滤液，冰箱放置备用；

取上述骨肽和蝎肽加入0.9％氯化钠注射液制备成每毫升含48毫克多肽、其中骨肽/蝎肽含量比为3∶1，3mg氯化钠的供试品溶液；调pH7.0-7.2，加总体积的0.1％的针用活性炭，煮沸5-10min，用蒸镏水补到每毫升含15毫克多肽，然后脱炭，0.22μm微孔簿膜过滤，无菌灌装，灌2ml 30毫克含2mg氯化钠的多肽在7ml瓶内、压半塞进行冻干，冻干时间不低于96hr，搁板最高温度50℃，瓶内最低温度不低于30℃，冷冻时最低温度-47℃，其中共凝点-30℃，即得成品。

2.权利要求1所述的复方骨肽冻干制剂，其中骨肽的具体制备步骤为：

A：骨肽的提取、去脂、浓缩：取健康新鲜或冷冻猪的四肢骨，洗净、打碎称重后，加两倍量蒸馏水，在1.5kg/cm3热压下抽提1.5小时，用双层纱布过滤，骨渣再加上述量蒸馏水，热压1.5小时，过滤；合并两次滤液，立即置于0-5℃冷室中，静置36小时，除去脂肪层，加热使冻状物融成液体，70℃以下真空浓缩至滤液总体积的1/5左右；

B：沉淀、浓缩：取浓缩液，加入95％乙醇至终浓度为体积比70％，静置沉淀36小时，滤除杂蛋白，得澄清液；再于60℃以下真空浓缩至总体积的1/4左右，除去乙醇，将除去乙醇的浓缩液，至无醇味，加入0.3％苯酚，补加蒸馏水至总体积； 

C：酸性、碱性沉淀：酸性沉淀：在搅拌下滴加6mol/L盐酸于上述溶液中，调PH4.0，常压加热100℃保持45分钟，离心，除去酸性蛋白，然后滤液消毒1小时，放冰箱过夜0～5℃；碱性沉淀：酸性沉淀放冰箱过夜后，次日取出，过滤，滤液在搅拌下加入50％氢氧化钠溶液，调pH8.5，100℃加热1小时，于冷室静置；次日离心，除去沉淀，得滤液；

D：中性沉淀：C步骤得到的滤液次日离心，除去沉淀，滤液用6mol/L盐酸调pH到7.0～7.2，常压消毒1小时，冷室放置过夜；

E：吸附：将D步骤得到的溶液再次过滤，滤液加入0.5％重量/体积活性炭，100℃搅拌加热30分钟，离心，得滤液，调pH7.0～7.2，100℃加热1小时，同时补水，测含量。

3.权利要求1所述的复方骨肽冻干制剂，其中蝎肽的具体制备步骤为：

a：取全蝎，按中国药典2000版附录XA测定浸出物，合格后投料；

b：全蝎肽的提取：粉碎，第一次加四倍量的95％乙醇，第二次加3倍量的95％乙醇，第三次加2倍量的95％乙醇，在沸水浴中回流三次，每次30分钟，合并提取液；

c：真空浓缩，回收乙醇：加提取液等量的蒸馏水，100℃浓缩，至无醇味，得浓缩液，测pH；

d：浓缩液用1mol/ml盐酸调pH4.0，100℃灭菌0.5hr，同时补水至总体积，冷却后过滤；

e：脱脂：将上述滤液用纸浆或滤纸过滤，除去油层，取滤液；

f：调pH：将上述滤液用1mol/mlNaOH调pH6.8；

g：除热原：将上述溶液，加入0.5％活性炭，搅拌加热100℃煮沸2hr，并用 蒸馏水补充所需含量，过滤到滤液，冰箱放置备用。