[发明专利]一种复方骨肽冻干制剂

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，更具体地，本发明公开了一种冻干的复方制剂。

背景技术

普通骨肽注射液是通过提取新鲜骨得到骨肽而制备得到的可以调节代谢， 促进骨生长。目前国内生产骨肽的工艺路线主要参照张天民教书主审及林元藻 教授主编《生化制药学》335-336页及李良等主编《最新生化药物制备技术》 392-393页中公开的方法制备得到。由于全蝎具有熄风镇惊、通络止痛的功效， 用于风湿完痹。全蝎与骨肽配伍，其优势互补，为了加强抗炎镇痛效果，目前 在骨肽中加入了蝎肽做成复方制剂，用于调节骨代谢、刺激成骨细胞增值，促 进新骨形成，以及调节钙、磷代谢，增加骨钙沉积，防治骨质疏松的作用。蝎 肽工艺路线按中国药典2000版一部附录XA醇浸法制备.

上市品的骨肽制剂也是用健康猪四肢骨与全蝎经提取的无菌水溶液经冷冻 干燥制成的无菌冻干品。每支含多肽类物质应不低于30mg，含总氮量应不低于 6mg，含生物大分子，分子量超过11000道尔顿不得超过2.5％。其中骨肽和蝎肽的 比例为2∶1-5∶1之间，经过临床验证其治愈率约为70％

虽然上述骨肽的复方制剂在一定程度上起到了刺激成骨细胞增值，促进新骨 形成，以及调节钙、磷代谢，增加骨钙沉积，防治骨质疏松的作用，但还存在 不稳定且治愈率不高的问题。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的申请人进行了大量试验，得到了一种稳定的 治愈率高的复方骨肽冻干制剂。

更具体的，本发明公开了一种复方骨肽冻干制剂，其中骨肽和蝎肽的质量 比为3∶1，辅料为氯化钠，其中骨肽和蝎肽分别按以下方法制备得到：

骨肽：

A：骨肽的提取、去脂、浓缩：取健康新鲜或冷冻猪的四肢骨，洗净、打碎 称重后，加两倍量蒸馏水，在1.5kg/cm³热压下抽提1.5小时，用双层纱布过滤， 骨渣再加上述量蒸馏水，热压1.5小时，过滤；合并两次滤液，立即置于0-5℃ 冷室中，静置36小时，除去脂肪层，加热使冻状物融成液体，70℃以下真空浓 缩至滤液总体积的1/5左右。

B：沉淀、浓缩：取浓缩液，加入95％乙醇至终浓度为70％(体积比)静置 沉淀36小时，滤除杂蛋白，得澄清液；再于60℃以下真空浓缩至总体积的1/4 左右，除去乙醇，将除去乙醇的浓缩液，至无醇味，加入0.3％苯酚，补加蒸馏 水至总体积。

C：酸性、碱性沉淀：酸性沉淀：在搅拌下滴加6mol/L盐酸于上述溶 液中，调PH4.0，常压加热100℃保持45分钟，离心，除去酸性蛋白，然后滤 液消毒1小时，放冰箱过夜(0～5℃)；碱性沉淀：酸性沉淀放冰箱过夜后，次日 取出，过滤，滤液在搅拌下加入50％氢氧化钠溶液，调pH8.5，100℃加热1小 时，于冷室静置。次日离心，除去沉淀，得滤液。

D：中性沉淀：C步骤得到的滤液次日离心，除去沉淀，滤液用6mol/L盐 酸调pH到7.0～7.2，常压消毒1小时，冷室放置过夜。

E：吸附：将D步骤得到的溶液再次过滤，滤液加入0.5％(重量/体积)活 性炭，100℃搅拌加热30分钟，离心，得滤液，调pH7.0～7.2，100℃加热1小时，同时 补水，测含量(取骨肽中间体溶液适量，稀释成浓度约5mg/ml，加入双缩脲试液 (取硫酸铜1.50g和酒石酸钾钠6.0g，加水500ml使溶解，边搅边加入10％氢氧 化钠溶液300ml，用水稀释至1000ml，混匀)4ml，混匀，室温放置30min，照 分光光度法(中国药典2000年版二部附录IV A)，在540nm的波长处测定吸收 度；另精密称取酪蛋白适量，加0.05mol/l氢氧化钠试液制成每1ml中约含7mg 的对照品溶液，精密量取2ml，加入双缩脲试液4ml，混匀，室温放置30min， 照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IV A)，在540nm的波长处测定吸 收度，测定吸收度，计算含量。应控制在30-33mg/ml。)，放冰箱备用。 蝎肽的提取：

a：取全蝎，按中国药典200版附录XA测定浸出物，合格后投料。

b：全蝎肽的提取：粉碎，第一次加四倍量的95％乙醇，第二次加3倍量的 95％乙醇，第三次加2倍量的95％乙醇，在沸水浴中回流三次，每次30分钟， 合并提取液。

c：真空浓缩，回收乙醇：加提取液等量的蒸馏水，100℃浓缩，至无醇味， 得浓缩液，测pH。