[发明专利]检测DNA碱基突变的方法

权利要求书

1.一种检测DNA中是否存在碱基突变的方法，依次包括以下步骤：

1)制备单链多核苷酸K1，所述K1与待测DNA的正常序列完全互补；

2)制备单链多核苷酸K2，所述K2的中间部分具有脱氧核酶活性，K2与K1至少有15nt完全互补，而且包含有至少10nt的脱氧核酶序列，K2与K1头尾至少各有6nt不互补；

3)制备脱氧核酶底物S，用荧光素标记S；底物S的DNA部分与K2完全互补，底物S中间有包含两个特异的RNA碱基的酶切位点；

4)将K1和K2混合，然后加入底物S，加入待测DNA和下述式(I)的化合物，同时设置加入由待测DNA的正常序列组成的DNA片段和下述式(I)的化合物的对照体系，按照如下方法确定待测DNA是否存在突变：若待测DNA反应体系的I_424nm/I_527nm小于等于对照体系的1.595±0.06，待测DNA存在碱基突变；若待测DNA反应体系的I_424nm/I_527nm等于对照体系的3.08±0.1，待测DNA不存在碱基突变；所述I_424nm为发射波长为424nm的发射峰的荧光强度；所述I_527nm为发射波长为527nm的发射峰的荧光强度。

式(I)；

式(I)中，m＝1～10，n＝2～100；R₁，R₂，R₃，R₄＝C_XH_2X+1或-O(C_XH_2X+1)，x＝1～10；R₅＝C_XH_2X+1，x＝1～3；R₆＝Br、Cl、I、CF₃COO或CH₃COO。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述式(I)中，m＝6、n＝6、R₁＝H、R₂＝H、R₃＝H、R₄＝H、R₅＝CH₃、R₆＝Br。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述式(I)中，m＝6、n＝6、R₁＝H、R₂＝H、R₃＝H，、R₄＝H、R₅＝CH₂CH₃、R₆＝I。