[发明专利]一种奶山羊weaver基因的单核苷酸多态性及其检测方法

说明书

技术领域

本发明生物技术领域，涉及奶山羊单核苷酸多态性(SNP)分子标记的筛查和检测，特别涉及一种奶山羊weaver基因的单核苷酸多态性及其检测方法。

背景技术

羊奶具有很高的营养价值，不含过敏原，营养成分均衡，易消化吸收，与人乳蛋白质组成相似，在国际营养界被誉为“奶中之王”。但是，我国羊奶的生产同发达国家相比差距巨大，主要是因为我国优秀奶山羊品种种源不足和种群遗传品质较差。

应用分子标记的现代育种技术是加快良种选育和提高种群遗传品质，从而增加奶山羊的产奶量和改善乳品质的先进的有效的方法。应用分子标记育种首先是在DNA水平上筛查和检测与奶山羊泌乳性状密切相关的遗传标记，其次是建立其基因多态性的快速检测方法；然后实现遗传标记辅助选择和实现早期诊断选择

近年来，人们发展了许多用于探寻分子遗传标记的方法，最常见的有单链构象多态技术(SSCP)、PCR-RFLP和直接测序技术等，但SSCP操作繁琐、耗时长，结果易造成误判；普通的PCR-RFLP方法要求待测多态性位点是某一特定酶切位点，应用范围局限；直接测序技术成本较高。

在哺乳动物中，weaver基因编码G蛋白偶联内向整流钾通道蛋白的亚单元，属于内向整流钾通道四个亚家族中的一员，在各种组织中广泛分布，特别在中枢神经系统中与多种受体偶联。Weaver基因在脑、心、肾和分泌细胞功能执行过程中扮演着非常重要的角色，同时它也间接地调控生长激素和胰岛素的分泌。

奶牛的weaver综合症是奶牛品种中存的一种常染色体单隐性基因控制的遗传缺陷。但一些研究表明，weaver基因与奶牛产奶性状存在显著的相关。Hoeschele和Meinert报道携带weaver症状的母牛的平均产奶量较正常纯合子高673.6Kg，乳脂率高26.0Kg(Hoeschele I，Meinert TR.Association of geneticdefects with yield and type traits：The weaver locus effect on yield.J Dairy Sci，1990，73：2503-2515.)。单雪松等研究表明，该基因的BMS2321和TGLA116微卫星位点对乳蛋白量、乳蛋白率的影响分别达到0.01的极显著水平和0.05的显著水平(单雪松，张沅，李宁.奶牛微卫星基因座与产奶性能关系的研究.2002，29(5)：430-433.)。

而对同源动物奶山羊的产奶性状的基因研究来说，奶山羊weaver基因的分子遗传变异特性的基础研究，不仅有利于遗传缺陷的控制，还有助于探明奶山羊产奶性状的遗传基础，从而进一步探寻应用分子遗传标记辅助选择来提高奶山羊生产性能的方法。但至今，weaver综合症的分子遗传机制在奶山羊中的研究国内外都没有报道。

发明内容

本发明解决的问题在于利用DNA池测序的方法筛查奶山羊weaver基因的目的DNA序列的多态性，寻找与奶山羊泌乳性状相关的SNP作为分子标记，提供一种奶山羊weaver基因的单核苷酸多态性及其检测方法，以此作为奶山羊分子育种和标记辅助选择的分子遗传标记，加快良种选育速度。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种奶山羊weaver基因的单核苷酸多态性，其基因多态性包括：

在奶山羊的weaver基因第99045位为T或C的碱基多态性；

在奶山羊的weaver基因第99116位为T或C的碱基多态性。

上述奶山羊weaver基因的单核苷酸多态性的检测方法为：以包含weaver基因的待测奶山羊全基因组DNA为模板，以引物对P为引物，PCR扩增奶山羊weaver基因；

所述的引物对P为：

正向引物：gcatccaaga gtttccctg            19；

反向引物：cttcacctca cctgggtcct gtaagc    26；

用限制性内切酶TaqI消化PCR扩增产物之后，再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定奶山羊的weaver基因第99045位的碱基多态性；

用限制性内切酶HhaI消化PCR扩增产物之后，再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定奶山羊的weaver基因第99116位的碱基多态性。

所述的PCR扩增的反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸10min。