[发明专利]一种眼镜蛇毒因子和眼镜蛇毒神经毒素的组合分离纯化方法

权利要求书

1.一种眼镜蛇毒因子和眼镜蛇毒神经毒素的组合分离纯化方法，其特征在于该方法包含以下步骤：

1）、取蛇毒溶解于纯化水或pH5-8的Tris缓冲液中，0-10℃温度下10000rpm低温离心10min，取上清液，过0.22μm或0.44μm微孔滤膜；

2）、将步骤1）所得到的上清液进行超滤并交换为分离缓冲液，采用截留分子量为3kDa—5kDa的超滤膜进行，缓冲液为pH5-8之间的Tris-HCl缓冲液或醋酸盐缓冲液或PBS缓冲液中的一种；

3）、将步骤2）所得到的蛇毒液先后进行离子交换层析和凝胶层析，取相应组分除盐、冷冻干燥，分别得到纯化的眼镜蛇毒神经毒素和眼镜蛇毒因子成分，其中：

a、将交换缓冲液后的蛇毒溶液用蠕动泵以10ml/min的流速上样到pH 7.5，20 mmol/L 的Tris缓冲液平衡的CM Sepharose FF层析柱（5.0×30cm），并用平衡缓冲液洗脱完流穿峰并收集之，之后的洗脱缓冲液中加入NaCL分别洗脱，加入的NaCL浓度为0.1M，0.2M，0.4M，所有步骤流速均为10ml/min，收集眼镜蛇神经毒素；

b、将收集的流穿峰用10KDa分子量的膜包超滤浓缩，浓缩液上样到50mM NaCl平衡的Superdex 200层析柱5.0×80cm，10ml/min上样，洗脱，收集眼镜蛇毒因子产品峰，将得到的眼镜蛇毒因子产品峰用10KDa分子量超滤膜超滤到5mM NaCl，过0.22μm滤膜，无菌分装，冷冻干燥后既得眼镜蛇毒因子成分。

2.根据权利要求1所述的一种眼镜蛇毒因子和眼镜蛇毒神经毒素的组合分离纯化方法，其特征在于所用蛇毒为眼镜蛇毒干粉或冻干粉。