[发明专利]一种杂交瘤细胞株及其产生的抗氯霉素单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明涉及抗氯霉素特异性单克隆抗体、产生抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株、抗氯霉素特异性单克隆抗体的制备方法及其在检测氯霉素药物残留中的应用，属于免疫化学技术领域。

背景技术

氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抑菌剂。通过脂溶性可弥散进入细菌细胞内，主要作用于细菌70s核糖体的50s亚基，抑制转肽酶，使肽链的增长受阻，抑制了肽链的形成，从而阻止蛋白质的合成，对革兰氏阴性菌的抑菌作用较革兰氏阳性菌强。氯霉素曾广泛用于治疗各种敏感菌的感染，后因其对造血系统有严重不良反应，故对其临床应用现已做出严格控制。氯霉素的主要不良反应是抑制骨髓造血机能：①可逆的各类血细胞减少，其中粒细胞首先下降。②不可逆的再生障碍性贫血，其原理可能与氯霉素抑制骨髓造血细胞内线粒体中的与细菌相同的70S核蛋白体有关。氯霉素也可产生胃肠道反应和二重感染。此外，少数情况下可导致皮疹及血管神经性水肿等过敏反应。

为了减少该药物对人类的危害，联合国粮农组织于1994年就禁止氯霉素的使用。欧盟、美国等许多国家规定动物源性食品中氯霉素残留量标准为“零容许量”，即不得检出。我国也于1999年出台相关规定，将氯霉素列为禁用药物，在食品中不得检出。但是由于氯霉素价格低廉，疗效显著，在临床和使用养殖上的使用屡禁不止，为了加强对氯霉素药物在动物性食品中的残留检测和监督，需要制备特异性强、可大量生产的抗氯霉素的单克隆抗体，以采用氯霉素酶联免疫分析法试剂盒和胶体金层析法快速检测氯霉素在动物性食品中的残留。然而作为小分子半抗原的氯霉素本身难以诱导机体产生抗体，必须将其与载体蛋白偶联获得人工合成的完全抗原才具有较强的抗原性。小分子抗原与载体蛋白的偶联效果及细胞融合后阳性克隆的筛选都直接影响着抗体的制备效果，是抗体制备的关键。

发明内容

本发明的目的是针对以上现有技术存在的缺点，提供一种与氯霉素及其类似物交叉反应弱的，亲和力和灵敏度高并具有特异性的、可大量生产的抗氯霉素单克隆抗体和该抗氯霉素单克隆抗体的制备方法。

本发明的另一个目的是提供分泌该特异性抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种产生抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株7C10，其保藏号为CGMCCNo.3574。

一种由杂交瘤细胞株7C10分泌的抗氯霉素单克隆抗体7C10’。

上述抗氯霉素单克隆抗体7C10’的制备方法，包括以下步骤：

a.制备免疫原和包被原：

氯霉素用碳二亚胺盐酸盐(EDC)活化，然后将载体蛋白与活化的氯霉素偶联得免疫原和包被原(Greg T.Hermanson.Bioconjugate techniques.AcademicPress，2008：216-219.)；

b.动物免疫注射：

以Balb/c小鼠作为免疫动物，腹腔注射免疫原并加强免疫；

c.筛选免疫小鼠血清：

检测加强免疫后的Balb/c小鼠血清抗体效价，筛选出血清效价高的小鼠进行加强免疫；

d.制备杂交瘤细胞：

取经过加强免疫的小鼠的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞进行细胞融合，经过至少2次亚克隆，获得稳定分泌抗氯霉素的单克隆抗体杂交瘤细胞株7C10；

e.制备并纯化单克隆抗体7C10’：

用杂交瘤细胞7C10对小鼠进行腹腔注射，采集腹水并通过液相层析纯化获得抗氯霉素单克隆抗体7C10’。

其中，步骤a中，以牛血清白蛋白或人血清白蛋白为载体蛋白，与氯霉素偶联反应得免疫原CAP-BSA或CAP-HAS；以卵清白蛋白为载体蛋白，与氯霉素偶联反应得包被原CAP-OVA。

所述碳二亚胺盐酸盐(EDC)活化氯霉素的反应时间小于20min，氯霉素与载体蛋白偶联反应时间至少为10小时。

所述步骤b中的每次免疫注射剂量至少为50μg/只小鼠。

本发明的再一个目的是提供该抗氯霉素单克隆抗体7C10’应用于氯霉素残留的定性或定量检测。

本发明的有益效果是：通过小鼠杂交瘤细胞株7C10产生特异性强、灵敏度和亲和力高的抗氯霉素单克隆抗体，与其它氯霉素类抗生素交叉反应率低，能够大量生产，可用于制备检测氯霉素的酶联免疫分析法试剂盒和胶体金试纸条，达到快速且灵敏地检测牛奶，肉类及水产品等食品中的氯霉素药物残留的效果。

附图说明

下面结合附图对本发明作进一步的说明。