[发明专利]三突变型低氧诱导因子1α经其辅助激活因子诱导的血管新生及其运用

权利要求书

1.三突变型HIF-1α蛋白质是由1-826个氨基酸残基组成[SEQ ID NO.1编码的蛋白质]，包含氧依赖降解结构域(ODDD)以及转录激活区(TAD)这两个重要的功能区，其中ODDD区内第402位上的脯氨酸(Pro)残基突变为其他任何氨基酸残基(例如丙氨酸)，和第564位上的脯氨酸(Pro)残基突变为其他任何氨基酸残基(例如丙氨酸)，以及TAD区内第803位上的天冬酰胺(Asn)残基突变为其他任何氨基酸残基(例如丙氨酸)。

2.权利要求1的三突变型HIF-1α蛋白质在常氧条件下的稳定性不再受脯氨酸羟化酶(PHD)的调控，从而使其在常氧条件下的稳定性不低于野生型HIF-1α蛋白质[SEQ ID NO.2编码的蛋白质]在低氧条件下的稳定性。

3.权利要求1的三突变型HIF-1α蛋白质在常氧条件下的转录活性不再受HIF-1抑制因子(FIH-1)的调控，从而其在常氧条件下也具有高效的转录活。

4.权利要求1的三突变型HIF-1α蛋白质，能够与CREB结合蛋白/腺病毒E1A相关蛋白P300(CBP/p300)以及组蛋白去乙酰酶(HDAC)等辅助激活因子结合促进血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PLGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)等HIF-1α下游靶基因的表达。

5.编码权利要求1的三突变型HIF-1α蛋白质是三突变型HIF-1α核酸分子[SEQ ID NO.1中的核酸分子序列]。

6.权利要求5的三突变型HIF-1α核酸分子，与野生型HIF-1α核酸分子[SEQ ID NO.2中的核酸分子序列]相比，其编码的三突变型HIF-1α蛋白质在常氧条件下更稳定且更高的表达水平，该HIF-1α蛋白质与野生型HIF-1α蛋白质相比在常氧条件下具有更高的转录活性。

7.含有权利要求1所述的三突变型HIF-1α核酸分子的 表达载体，优选是病毒载体，更优选是腺病毒载体，特别是5型腺病毒载体。

8.权利要求7的载体，其是能够表达权利要求6-7的三突变型HIF-1α核酸分子的表达载体；优选地，该表达载体与含有野生型HIF-1α蛋白质编码核酸分子的相同载体相比，能够更稳定、更高水平表达HIF-1α蛋白质；该HIF-1α蛋白质优选与野生型HIF-1α蛋白质相比具有提高的转录因子活性。

9.含有权利要求2中载体的宿主细胞，可以是原核细胞，也可以是真核细胞。

10.提高HIF-1α蛋白质在常氧条件下的稳定性或者表达水平、和/或提高HIF-1α蛋白质的转录活性的体外方法，包括同时将野生型HIF-1α蛋白质(优选人HIF-1α蛋白质)分子序列中第402位点、第564位点上的脯氨酸(Pro)残基突变为其他任何氨基酸残基(例如丙氨酸)，以及第803位上的天冬酰胺(Asn)残基突变为其他任何氨基酸残基(例如丙氨酸)，其与野生型HIF-1α蛋白质相比，该三突变型HIF-1α蛋白质第402位、第564位和第803位点上的氨基酸发生了突变，使得该三突变型HIF-1α蛋白质在常氧条件下的稳定性或者表达水平与野生型HIF-1α蛋白质相比提高了，以及该三突变型HIF-1α蛋白质的转录活性与野生型HIF-1α蛋白质相比也提高了。

11.提供HIF-1α核酸分子呈成组型表达的体外方法：在允许权利要求1所述三突变型HIF-1α核酸分子表达的条件下，用该核酸分子转染细胞，从而使核酸分子呈成组型表达。

12.提高HIF-1α核酸分子表达的体外方法，在允许权利要求7中载体所携带的核酸分子表达的条件下，通过该载体介导权利要求1的三突变型HIF-1α核酸分子转染细胞，从而增加HIF-1α核酸分子在该细胞中的表达。

13.提供一个减轻低氧或缺血所导致组织损伤的方法：在机 体的低氧或缺血部位给予有效剂量的权利要求1所提供的三突变型HIF-1α核酸分子，该核酸分子由药学上可接受的载体所介导，从而减轻低氧或缺血所导致的组织损伤。

14.权利要求13所述的低氧或缺血所导致组织损伤与心、脑，或周围循环障碍密切相关。