[发明专利]三突变型低氧诱导因子1α经其辅助激活因子诱导的血管新生及其运用

说明书

发明领域

本发明涉及三突变型低氧诱导因子1α基因治疗领域。更具体地，本发明提供一种利用三突变型低氧诱导因子1α基因促进血管新生的方法，包括三突变型低氧诱导因子1α基因的构建，含有三突变型低氧诱导因子1α基因的载体的构建，特别是重组腺病毒载体的构建；该三突变型HIF-1α蛋白质，能够与CREB结合蛋白/腺病毒E1A相关蛋白P300(CBP/p300)以及组蛋白去乙酰酶(HDAC)等辅助激活因子结合促进血管内皮生长因子(VEGF)等HIF-1α下游靶基因的表达，以及它们作为冠心病、外周动脉缺血性血管疾病以及间歇性跛行等的治疗剂应用。

背景技术

缺血性血管疾病(冠心病、缺血性脑血管病以及外周血管病)已成为威胁人类健康的重大疾病。我国缺血性血管疾病发病率和死亡率呈逐年上升趋势。目前，对其主要治疗措施包括常规药物治疗、血运重建等，已经取得了重大成就。然而，相当一部分患者目前的药物治疗难以见效，也不适于常规血运重建术处理，因此必须开辟新的治疗途径。

近年来，促血管新生已成为缺血性血管疾病的治疗新方向，是当前国际上最热点研究领域之一。先前曾报道了许多促血管新生因子，如血管内皮生长因子(VEGF)、Flt1(VEGF-receptor)、成纤维生成因子(FGF)、血小板衍化生长因子(PDGF)、Endoglin、转化生成因子β(TGF-β)和血管生成素(angiopoietin)等。有些因子曾试用于临床，比如VEGF，但结果显示VEGF可导致新生血管不成熟、组织水肿及血管渗漏，因而其临床试验已停止(Lee，Springer et al.2000；Schwarz，Speakman et al.2000；Grines，Watkins et al.2002；Losordo，Vale et al.2002；Masaki，Yonemitsu et al.2002；Fam，Verma et al.2003；Lee，Rentz et al.2003；Semenza 2003)。

血管新生是组织对缺氧的适应性反应，广泛存在于从胚胎发育、伤口愈合到肿瘤生长等生理/病理过程中；同时，它是一个复杂的生物学过程，需要多种因子参与，依靠单一的促血管新生因子很难完成。近10年研究显示：低氧诱导因子1(hypoxia inducible factor 1，HIF-1)是一个非常重要的核转录因子，能直接或间接调控100多种下游靶基因(review in(Wenger，Stiehl et al.2005；Ke and Costa 2006))，这些下游靶基因包括：血管生长、血管张力、糖代谢、红细胞生成、干细胞诱导分化等(Kaluz，Kaluzova et al.2008)。到目前为止，已查明经HIF-1α直接调控参与血管新生的基因有30多种，是血管新生的上游核心调控因子(Thurston，Suri et al.1999；Bruick and McKnight 2001；Semenza 2002；Hirota and Semenza 2005)。《Science》曾经发表评述：“ Discovery of these could open up new therapeutic possibilitiesfor the many diseases such as ischemic

HIF-1是由α和β两个亚基组成的异二聚体(Wang，Jiang et al.1995)，α亚基为其功能活性发挥的关键性调节亚基，组织中HIF-1α的量与活性受氧浓度的调节。HIF-1α结构域中含有氧依赖降解区(OxygenDependent Degradation Domain，ODDD)，与HIF-1α的稳定性有关(Pugh，O′Rourke et al.1997)。同时HIF-1α的C末端含有2个相对独立的转录激活区(Transactivation Domains，TAD)：N-TAD和C-TAD(Ruas，Poellinger et al.2002)，其中N-TAD与ODDD有部分重叠，参与HIF-1α稳定性的调节；C-TAD则与共激活因子CBP/P300结合启动下游靶基因的转录(Lando，Peet et al.2002)。