[发明专利]一种原虫样本的染色方法

说明书

技术领域：

本发明涉及生物领域，尤其涉及一种将病理切片染色方法与原虫涂片染色方法相结合来实现原虫样本长期保存的方法，具体来说是一种原虫样本的染色方法。

背景技术：

蓝氏贾第鞭毛虫简称贾第虫，主要寄生在人和某些哺乳动物的小肠内，引起以腹泻为主要症状的蓝氏贾第鞭毛虫病。本病多见于儿童和旅游者，故又称“旅游者腹泻”。贾第虫感染呈世界性分布，感染率为1％～20％，儿童、年老体弱者和免疫功能缺陷者尤其易感。我国的流行也相当普遍，呈全国性分布。贾第虫病的感染不同于其他肠道寄生虫，它不仅多见于经济落后、卫生状况不良的国家和地区，而且在工业发达的国家也出现流行或暴发流行。如今贾第虫病已被列为全世界危害人类健康的十种主要寄生虫病之一。

诊断贾第虫常用的病原学检查方法是用生理盐水直接涂片法或滴加2％的碘液从粪便中查到滋养体或包囊。虽然这种方法用于临床诊断简便易行，但是无法用于保存标本，而且由于内部结构不能清晰显示，因此将其用于实验教学的效果并不理想。

相反，三色染色的标本色彩鲜艳，虫体内部结构清晰，长期保存颜色基本保持不变。经三色染色的贾第虫虫体包囊呈淡绿色，椭圆形，囊壁较厚，不着色。核偏于一端，核仁、轴柱、丝状物均呈深紫色。传统的三色染色要求粪检标本在载玻片上涂成薄膜并且放入肖氏固定液中固定30分钟。而肖氏固定液的主要成分之一氯化高汞为剧毒化学品，常温下微量挥发，对人体危害严重，并且污染周围环境。因此，用一种相对低毒环保的固定液来替代肖氏固定液，同时又能达到原有的染色效果，一方面可以将标本保留存档，另一方面也有助于教学和传统技术的传承。

发明内容：

本发明的目的是提供一种原虫样本的染色方法，所述的这种原虫样本的染色方法要解决现有技术中的固定标本的液体太毒，对人体危害严重，并且污染周围环境的技术问题以及染色标本的褪色问题。

本发明提供了一种原虫样本的染色方法，包括一个配制溶液的步骤，所述的溶液包括聚乙烯醇固定液、三色染液和Masson三色染液，包括一个制作刮片标本的步骤，在所述的制作刮片标本的步骤中，首先在固定液中加入冰醋酸，搅拌混匀，然后将粪样加入固定液，搅拌混匀，吸干固定液，将粪渣刮至载玻片上保存，还包括一个染色的步骤，首先将粪便刮片放入乙醇中清洗，将粪便刮片放在三色染液中染色，吸干染色液后，在添加有冰醋酸的乙醇中清洗，吸干后，将粪便刮片放入Weigert氏铁苏木素染液10-15分钟，水洗，然后采用盐酸酒精分化，再用丽春红酸性品红染液染5-10分钟，水洗，再用磷钼酸溶液处理，吸干后用苯胺蓝染液复染5-10分钟，再用冰醋酸处理，酒精脱水，二甲苯透明处理和中性树胶封固。

进一步的，所述的聚乙烯醇固定液通过如下步骤配制，

a)配制硫酸铜水溶液，硫酸铜水溶液的质量百分比浓度在15-20％之间；

b)在上述的硫酸铜水溶液中加入聚乙烯醇，充分溶解，聚乙烯醇的加入量为硫酸铜水溶液的质量的1％-1.2％，然后在其中加入占硫酸铜水溶液的体积50-70％的90-99％质量百分比浓度的乙醇，充分混匀；

c)使用前以硫酸铜水溶液计算，按照10∶0.8-1.2的比例加入冰醋酸。

进一步的，所述的三色染液通过如下步骤配制：首先配制一个三色基础液，所述的三色基础液由变色酸2R、亮绿、磷钨酸和水组成，所述的变色酸2R占所述的三色染液的重量百分比为0.5-0.7％，所述的亮绿占所述的三色染液的重量百分比为0.2-0.4％，所述的磷钨酸占所述的三色染液的重量百分比为0.6-0.8％，余量为水，然后在三色基础液中加入冰醋酸，所述的冰醋酸的加入量为所述的三色基础液的体积的0.8-1.2％。

进一步的，所述的Masson三色染色液通过如下步骤配制，

1)配制Weigert氏铁苏木素染液：

A液：配制苏木素酒精溶液，使得苏木素在酒精中的质量百分比浓度为0.8％-1.2％；

B液：将重量百分比浓度为25-35％的三氯化铁水溶液加入水中，三氯化铁水溶液占B液的体积百分比为3-5％，然后在水中加入质量百分比浓度为25-40％的浓盐酸，浓盐酸占B液的体积百分比为0.8-1.2％；

使用前取A液与B液等量混合即可；

2)配制丽春红酸性品红溶液：