[发明专利]一种用于杂交捕获检测基因组整合型病毒的试剂盒

权利要求书

1.一种用于杂交捕获检测基因组整合型病毒的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括以下这些主要组分：

1)固定有人基因组DNA单链分子捕获混合物的固相介质，

2)用于鉴定杂交捕获效率、特异性的阳性和阴性质控品，

3)可对捕获得到的目标DNA分子被捕获混合物进行Real-time PCR鉴定的引物对和分子探针。

2.如权利要求1所述用于杂交捕获检测基因组整合型病毒的试剂盒，其特征在于在制备固定有人基因组DNA单链分子捕获混合物的固相介质的过程中用到的DNA单链分子具有如下特征：

1)这些单链DNA分子是一种片段化的单链DNA分子混合物，它们来自于1个或1个以上不同个体的人类有核细胞；

2)这些单链DNA分子是通过将片段化的双链DNA分子经过加热变性处理而得到，它们是以单链形态存在的DNA分子；

3)这些单链DNA分子对应的片段化双链DNA分子是通过可识别4～6核苷酸序列、足够且不过量的II型限制性内切核酸酶处理人类有核细胞DNA后得到。

3.如权利要求1所述用于杂交捕获检测基因组整合型病毒的试剂盒，其特征在于阳性质控品为一个化学结构上连续的DNA分子，此DNA分子包含如下序列成分：

1)上游引物结合区：5’-GGAATGGACTGGCTGGTAGATGGG-3’，

2)探针结合区：5’-GGGAGTAGGCTGTGTATGGAA-3’，

3)杂交识别区人源性序列：5’-ACTGGGACGACATGGAGAAATCTGGCACCACACCTTCTACAATGAGCTG-3’，

4)下游引物结合区：5’-GACAAGCGTGGAGTGACTGACT-3’。

4.如权利要求1所述用于杂交捕获检测基因组整合型病毒的试剂盒，其特征在于阴性质控品为一个化学结构上连续的DNA分子，此DNA分子包含如下序列成分：

1)上游引物结合区：5’-GAGACAATCAATCGGACGACAGGG-3’，

2)探针结合区：5’-GGGAGTAGGCTGTGTATGGAA-3’，

3)下游引物结合区：5’-GGTGTAGTACATTCTGAGCCGA-3’。

5.如权利要求1所述用于杂交捕获检测基因组整合型病毒的试剂盒，其特征在于按照如下DNA序列，合成引物对和分子探针，对阳性质控品进行Real-time PCR鉴定：

1)上游引物序列：5’-GGAATGGACTGGCTGGTAGATGGG-3’，

2)下游引物序列：5’-AGTCAGTCACTCCACGCTTGTC-3’，

3)分子探针序列：5’-GGGAGTAGGCTGTGTATGGAA-3’。

6.如权利要求1所述用于杂交捕获检测基因组整合型病毒的试剂盒，其特征在于按照如下DNA序列，合成引物对和分子探针对阴性质控品进行Real-time PCR鉴定：

1)上游引物序列：5’-GAGACAATCAATCGGACGACAGGG-3’，

2)下游引物序列：5’-TCGGCTCAGAATGTACTACACC-3’，

3)分子探针序列：5’-GGGAGTAGGCTGTGTATGGAA-3’。

7.如权利要求1所述用于杂交捕获检测基因组整合型病毒的试剂盒，其特征在于按照如下DNA序列，合成引物对和探针对整合型病毒DNA分子进行Real-time PCR鉴定：

1)用于鉴定人乙肝病毒的引物对和探针序列：

上游引物序列：5′-CTTCTCATCTGCCGGACCGTN-3′

下游引物序列：5′-CTCCATGCTACGTGCAGAGGN-3′

分子探针序列：5′-TCGCTTCACCTCTGCACGTA-3′

2)用于鉴定人乳头瘤病毒的引物对和探针序列：

上游引物序列：5’-GATTTAWBHATAGTRTATAGAGAN-3’

下游引物序列：5’-ANATGTCTTHNTTTTTCTDSWGGRN-3’

分子探针序列：5’-TTIIIIICIAIIITIAGIGAIT-3’

3)用于鉴定EB病毒的引物对和探针序列：

上游引物序列：5′-CCTCGGACAGCTCCTAAGAAN-3′

下游引物序列：5′-CCTGAAGGTGAACCGCTTACN-3′

分子探针序列：5′-GGTCCTCGTCCAGCAAGAAG-3′

4)用于鉴定I型人单纯疱疹病毒的引物对和探针序列：

上游引物序列：5′-GGCGATTGGTCGTAATCCAGN-3′

下游引物序列：5′-CGGCGACCTGTATAACGTGTN-3′

分子探针序列：5′-GTTATACAGGTCGCCGTTGG-3′

5)用于鉴定II型人单纯疱疹病毒的引物对和探针序列：

上游引物序列：5′-GTCGGCCAAGACGTCCAAGAN-3′

下游引物序列：5′-CGCATCGAGGACACGCTGTTN-3′

分子探针序列：5′-ATGTGGTACAAGTCCCCGTT-3′

其中：R＝A、G；Y＝C、T；K＝G、T；S＝G、C；M＝A、C；W＝A、T；B＝G、C、T；V＝A、G、C；D＝A、G、T；H＝A、C、T；N＝A、G、C、T；I＝肌苷。