[发明专利]一种提取禽类全血DNA的方法

权利要求书

1.一种提取禽类全血DNA的方法，其特征在于，包括下述步骤：

1)冷冻血液在室温融化以后，取血液22μl加入离心管，再加入缓冲液860μl、裂解液100μl、蛋白酶K15μl，总体积不超过1000μl；漩涡振荡5分钟，使其完全混匀；

2)56℃金属浴或水浴消化至少3小时；

3)加入预冷的氯仿500μl，旋转混合5分钟，使其完全混匀；

4)13000r/min离心5分钟，吸取上层水相；

5)在上清液中加入等体积预冷的的异丙醇，缓慢摇动离心管5分钟；

6)13000r/min离心5分钟，使DNA贴到离心管壁上，弃上清液；

7)用预冷的70％乙醇洗涤沉淀物2次，每次洗涤后，13000r/min离心8分钟，弃上清液；

8)于真空干燥器中或45℃烘箱中干燥DNA沉淀物，待团块透明后，视沉淀大小，加入100～200μl TE溶液充分溶解DNA，-20℃冰箱中保存。

2.根据权利要求1所述的一种提取禽类全血DNA的方法，其特征在于，所述缓冲液由Tris-base 0.6057g、NaCl4.383g、EDTA0.29225g、SDS 5g定容至500ml，用NaOH调节pH，使pH保持在8.0～8.3之间。

3.根据权利要求1所述的一种提取禽类全血DNA的方法，其特征在于，所述裂解液是浓度为47.765g/100ml的盐酸胍。

4.根据权利要求1所述的一种提取禽类全血DNA的方法，其特征在于，所述蛋白酶K的浓度为20mg/ml。

5.根据权利要求1所述的一种提取禽类全血DNA的方法，其特征在于，所述TE溶液由pH 8.0浓度1mol/L的Tris-HCl 10ml，pH8.0浓度为0.5mol/L EDTANa₂2ml，加入ddH2O到1000ml，混匀，调pH至8.0，定溶至1000ml制得。

6.根据权利要求1所述的一种提取禽类全血DNA的方法，其特征在于，所述预冷的氯仿、预冷的的异丙醇、预冷的70％乙醇其预冷温度均为-20℃。

7.根据权利要求1所述的一种提取禽类全血DNA的方法，其特征在于，所述步骤4)中吸取上层水相500～600μl到另一干净的离心管中，吸取时不搅动或吸到下面两相。

8.根据权利要求1所述的一种提取禽类全血DNA的方法，其特征在于，在试验前先对本方法中所用器具、试剂、耗材进行高压灭菌。

9.根据权利要求1或3所述的一种提取禽类全血DNA的方法，其特征在于，所述裂解液由47.765g盐酸胍溶于100ml灭菌超纯水中制得。

10.根据权利要求1或4所述的一种提取禽类全血DNA的方法，其特征在于，所述蛋白酶K由20mg蛋白酶K溶于1ml灭菌超纯水中制得。