[发明专利]一种Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白的制备方法及其用途

权利要求书

1.一种Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白，按如下方法制备：

步骤1)将Qβ噬菌体CP蛋白基因终止密码子由TGA突变为强终止密码子TAA后，克隆至原核表达载体pET28a(+)中，得到编码CP蛋白质粒pETQβ-CP；

步骤2)在Qβ噬菌体CP延伸蛋白基因中编码免疫优势决定区位置，即Qβ噬菌体CP延伸蛋白基因第72位至73位密码子间，插入编码赖氨酸和亮氨酸的核苷酸AAGCTT，并将CP蛋白基因终止密码子由TGA突变为GGA后克隆至原核表达载体PGEX4T-2中，得到编码A1蛋白质粒pGEXQβ-A1；

步骤3)突变后编码Qβ噬菌体CP蛋白质粒与A1蛋白质粒共同转化大肠杆菌，诱导后表达得到病毒样颗粒蛋白Qβ-2aa。

2.根据权利要求1所述的Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白，其特征在于：在步骤2)中将CP蛋白基因终止密码子由TGA突变为GGA后，使得大肠杆菌可以越过CP蛋白终止密码子，继续表达突变后CP延伸蛋白，最终得到突变后A1蛋白。

3.根据权利要求1所述Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白，其特征在于：在Qβ噬菌体CP蛋白辅助下，突变后A1蛋白自行聚合为病毒样颗粒Qβ-2aa。

4.根据权利要求1所述Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白，其特征在于：所述CP延伸蛋白第72位至73位氨基酸间为Qβ噬菌体衣壳蛋白刺突顶端，是机体免疫系统识别的主要部位，即病毒样颗粒的免疫优势决定区；步骤2)中插入CP延伸蛋白基因第72位至73位密码子间为编码赖氨酸和亮氨酸基因AAGCTT；步骤3)中表达得到病毒样颗粒A1蛋白免疫优势决定区中有赖氨酸和亮氨酸。

5.一种制备权利要求1耦联短肽抗原Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白的方法，按如下方法制备：

步骤1)将Qβ噬菌体CP蛋白基因终止密码子由TGA突变为强终止密码子TAA后，克隆至原核表达载体pET28a(+)中，得到编码CP蛋白质粒pETQβ-CP；

步骤2)在Qβ噬菌体CP延伸蛋白基因中编码免疫优势决定区位置，即Qβ噬菌体CP延伸蛋白基因第72位至73位密码子间，插入编码赖氨酸和亮氨酸的核苷酸AAGCTT，并将CP蛋白基因终止密码子由TGA突变为GGA后克隆至原核表达载体PGEX4T-2中，得到编码A1蛋白质粒pGEXQβ-A1；

步骤3)突变后编码Qβ噬菌体CP蛋白质粒与A1蛋白质粒共同转化大肠杆菌，诱导后表达得到病毒样颗粒蛋白Qβ-2aa；

步骤4)使用异双功能交联剂将短肽抗原耦联至Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒。

6.根据权利要求5所述的耦联短肽抗原Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白，其特征在于：步骤1)Qβ噬菌体CP蛋白基因终止密码子由TGA突变为强终止密码子TAA；步骤2)所述免疫优势决定区为Qβ噬菌体CP延伸蛋白第72位至73位氨基酸间部分，位于病毒衣壳蛋白刺突顶端，是机体免疫系统主要识别区域，将CP蛋白基因终止密码子由TGA突变为GGA后，使得大肠杆菌可以越过CP蛋白终止密码子，继续表达突变后CP延伸蛋白，最终得到突变后A1蛋白。

7.根据权利要求5或6所述的耦联短肽抗原Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白，其特征在于：在Qβ噬菌体CP蛋白辅助下，突变后A1蛋白自行聚合为病毒样颗粒Qβ-2aa。

8.根据权利要求5所述耦联短肽抗原Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白，其特征在于：在步骤2)中插入CP延伸蛋白基因第72位至73位密码子间为编码赖氨酸和亮氨酸基因AAGCTT；在步骤3)中表达得到病毒样颗粒A1蛋白免疫优势决定区中有赖氨酸和亮氨酸。

9.根据权利要求5或6所述耦联短肽抗原Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白，其特征在于：所述耦联短肽抗原为大鼠AT1受体胞外第二环肽RNVFFIE，在其N端添加一个半胱氨酸(C)，使得异双功能交联剂Sulfo-SMCC可以将短肽抗原N端半胱氨酸，和病毒样颗粒A1蛋白免疫优势决定区赖氨酸耦联，得到耦联短肽抗原病毒样颗粒Qβ-2aa。

10.应用权利要求5或9所述耦联短肽抗原Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白，其特征在于：是将短肽抗原耦联到Qβ-2aa病毒样颗粒而得到的疫苗。