[发明专利]旋毛虫病斑点免疫金渗滤法诊断试剂盒

权利要求书

1.一种旋毛虫病斑点免疫金渗滤法诊断试剂盒，其特征在于：它包括下述制备步骤：

第一步：制备Ts21重组蛋白

根据GenBank核酸数据库中Trichinella spiralis Hypothetical ORF 17.20的基因序列，利用生物信息学软件Primer5.0设计引物，通过RT-PCR获取旋毛虫Ts-21基因，构建表达载体pAML-c2X-Ts21，转化大肠埃希菌TB1，获得阳性克隆pAML-c2X-Ts21/TB1；挑取pAML-c2X-Ts21/TB1单菌落至5mL含氨苄青霉素100μg/mL LB培养液中，37℃培养至OD₆₀₀≌0.6，加入诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷至终浓度0.25mmol/L，37℃诱导培养4小时，离心收集菌体，超声破碎菌体，4℃，4320g离心10分钟后收集上清液；经Amylose树脂预装柱亲和层析纯化和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定，得到纯化的Ts21重组蛋白；测定蛋白浓度、分装，-80℃保存备用；

第二步：制备胶体金标记物

采用枸橼酸三钠还原氯金酸法制备颗粒直径为15nm的胶体金溶液；调节胶体金溶液pH至5.8～6.0后过滤；将浓度为1mg/ml的待标记蛋白质溶液缓慢搅拌并分次加入胶体金溶液中，混合均匀，加1％聚乙二醇，使其终浓度为0.05％，然后离心纯化，得10％浓缩的胶体金标记物，4℃保存备用；

第三步：制备试剂盒

将硝酸纤维素膜(1)浸入1×PBST溶液30min～1h，取出室温晾干，在膜(1)上压出2个排列设置的圆圈，用移液器将人IgG包被在其中一个圆圈的圆心处，记为质控点C；在另一个圆圈的圆心处包被第一步所得的Ts21重组蛋白，记为检测点T；包被完毕室温晾干后，将硝酸纤维素膜(1)浸泡于含1％牛血清白蛋白的封闭液中，4℃封闭过夜，次日取出，经洗涤、室温干燥，再放入烘箱内完全干燥后密封于塑料袋中，4℃保存备用；取上盖开设有观测窗口(2)的盒体(3)，在盒体(3)底部垫入吸水滤纸(4)，最上层放置上述包被有抗原的硝酸纤维素膜(1)，盖上上盖后，膜(1)上的质控点C和监测点T从上盖的观测窗口(2)露出，然后将其密封后4℃保存备用。