[发明专利]一种微生物酶法拆分DL-半胱氨酸制备D-胱氨酸和L-色氨酸的方法

权利要求书

1.一种微生物酶法拆分DL-半胱氨酸制备D-胱氨酸和L-色氨酸的方法，其特征在于该方法包括：

以表达色氨酸酶的基因工程重组菌的发酵液为酶源，以DL-半胱氨酸和吲哚为底物，在40至60℃下，pH值为7至9，经酶法转化反应2至6h，产生D-半胱氨酸和L-色氨酸，进一步氧化后得到D-胱氨酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述重组色氨酸酶基因工程菌的发酵液的宿主菌为枯草芽胞杆菌WB600，表达载体为分泌型pWB980-tnaA重组表达载体，重组色氨酸酶菌体细胞的发酵液中表达有高活性的色氨酸酶。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：以所述的重组枯草芽孢杆菌发酵液为酶源，在每升发酵液中底物DL-半胱氨酸的加入量为5至50g；底物吲哚用量为3至30g；辅酶磷酸吡哆醛的量为0.05g至0.25g。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：每升发酵液中，底物DL-半胱氨酸的用量优选为20g；底物吲哚用量优选为15g；辅酶磷酸吡哆醛的优选用量为0.15g；优选转化温度为50℃；优选转化pH值为8；优选转化时间为3h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：D-胱氨酸的纯化方法是：酶促转化液通入空气氧化5至24h，使产生的D-半胱氨酸氧化为D-胱氨酸，再调节pH为5使D-胱氨酸等电点结晶析出，收集沉淀得D-胱氨酸。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：L-色氨酸的纯化方法是，权利要求5等电点结晶后的上清液，采用S-8型大孔树脂去除其中残留的吲哚，再采用NKA-II型大孔树脂吸附L-色氨酸，经50％乙醇洗脱、减压浓缩干燥，获得L-色氨酸。