[发明专利]一种重组腺病毒及其制备方法和应用无效
| 申请号： | 201010033368.X | 申请日： | 2010-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN101921769A | 公开（公告）日： | 2010-12-22 |
| 发明（设计）人： | 梁爱华;杜军;付月君;张志云;王伟;柴宝峰;申泉;杨仁佳 | 申请（专利权）人： | 山西大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N7/01;A61K48/00;A61P35/00;A61P25/00 |
| 代理公司： | 山西五维专利事务所(有限公司) 14105 | 代理人： | 杨耀田 |
| 地址： | 030006 山*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 病毒 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种能在哺乳动物细胞中高效表达的东亚钳蝎氯离子通道毒素(BmK CT)的基因，其特征在于，核苷酸序列为SEQ ID No.2。
2.一种重组腺病毒，含有核苷酸序列为SEQ ID No.2的基因。
3.如权利要求2的重组腺病毒，其特征在于保藏号：CGMCC No.3499。
4.如权利要求3所述的重组腺病毒的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)利用偏爱密码子表合成能在哺乳动物细胞中高效表达的东亚钳蝎氯离子通道毒素基因(BmK CT)；合成特异性引物：
上游：5’-tt gat atc atg tgc ggc ccc tgc ttc-3’
下游：5’-at ctc gag tca gat acg gtt gca cag gc-3’
经PCR扩增获得蝎氯离子通道毒素基因，且分别在5’端和3’端加上Xho I和Hind III酶切位点并连接到中间载体pShuttle-IRES-hrGFP-2中获得重组质粒pShuttle-IRES-hrGFP-2-BmKCT；
(2)将重组质粒pShuttle-IRES-hrGFP-2-BmK CT用Pme I酶切线性化后转化含有腺病毒基因组pAdEasy-1的BJ5183细菌中发生同源重组，筛选出重组腺病毒基因组pAdEasy-1-BmKCT后转化到XL10 Gold细菌中大量复制，将重组的腺病毒基因组酶切线性化后转染AD293细胞，包装复制后获得重组腺病毒AdEasy-1-BmK CT；
(3)将步骤(2)获得的重组腺病毒AdEasy-1-BmK CT感染AD293细胞并在细胞内大量扩增，待细胞全部出现病变时收集细胞，-80℃/37℃反复冻融3-4次使细胞裂解，收集裂解液，CsCl密度梯度离心，取中间层透析去除病毒液中CsCl，获得大量的重组腺病毒AdEasy-1-BmK CT。
5.如权利要求2或3所述的重组腺病毒在制备治疗神经胶质瘤药物中的应用。
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