[发明专利]鲑鱼肾杆菌实时荧光RT-PCR检测方法和试剂盒

权利要求书

1.鲑鱼肾杆菌(Renibacterium salmoninarum)的实时荧光RT-PCR检测方法，所述方法包括利用特异性探针和引物对，以细菌DNA为模板进行实时荧光RT-PCR反应，其特征在于：所述引物对分别含有Seq ID No.1和Seq ID No.2所示的序列；

Seq ID No.1：5’-CCG AAG AGC CCA CCA ATG AC-3’

Seq ID No.2：5’-GAC TTA GAC GAC GCC GTA GC-3’

所述探针为能与鲑鱼肾杆菌的基因组DNA位于所述引物对之间的序列相同或互补、且长度为15～30bp的寡核苷酸序列，并且所述探针的5’端和3’端分别标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述探针含有SeqID No.3所示的序列，

Seq ID No.3：5’-CGG ATT GCC GTC GCC GCA GC-3’。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：所述探针5’端标记的荧光报告基团为FAM，3’端标记的荧光淬灭基团为TAMRA。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的检测方法，其特征在于：所述RT-PCR反应的引物终浓度为0.9～1.1μmol/L，探针终浓度为0.09～0.11μmol/L。

5.根据权利要求1～4任意一项所述的检测方法，其特征在于：所述RT-PCR的反应的退火温度为53℃～57℃。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述RT-PCR的反应条件包括：50℃，2min；94℃，10min；40循环：94℃20s，55℃40s。

7.鲑鱼肾杆菌(Renibacterium salmoninarum)的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有能扩增出鲑鱼肾杆菌的基因片段的引物对，所述引物对分别含有Seq ID No.1和Seq ID No.2所示的序列，

Seq ID No.1：5’-CCG AAG AGC CCA CCA ATG AC-3’

Seq ID No.2：5’-GAC TTA GAC GAC GCC GTA GC-3’。

8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒用于实时荧光RT-PCR检测，并且所述试剂盒还含有能与鲑鱼肾杆菌的基因组DNA位于所述引物对之间的序列相同或互补、且长度为15～30bp的寡核苷酸探针，并且所述探针的5’端和3’端分别标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团。

9.根据权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于：所述探针含有Seq ID No.3所示的序列，

Seq ID No.3：5’-CGG ATT GCC GTC GCC GCA GC-3’。

10.根据权利要求9所述的检测试剂盒，其特征在于：所述探针5’端标记的荧光报告基团为FAM，3’端标记的荧光淬灭基团为TAMRA。