[发明专利]一种测定果蔬酱中棒曲霉素的方法

说明书

发明领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有害毒素化合物的检测方法，特别是涉及一种快速检测果蔬酱中棒曲霉素的方法领域。

背景技术

棒曲霉素(Patulin，PAT)，又称展青霉素。化学名称：4-羟基-4H-呋喃(3，2-c)并吡喃-2(6H)酮(4-hydroxy-4H-Furo[3，2-c]Pyran-2(6H)-One)，是属于真菌毒素的一类有毒化合物，主要是青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)和丝衣霉(Byssochlamys)等多种真菌的次生代谢产物，有强烈的抗菌活性，对动物的细胞和组织有很强的毒性，具有潜在的致癌、致畸和致突变性，主要存在于苹果、梨和葡萄。欧盟规定果汁、特别是苹果汁及含苹果汁的酒精饮料中，棒曲霉素最大限量为50μg/L，固体苹果产品中，棒曲霉素最大限量为25μg/L，儿童用苹果汁和婴儿食品中，棒曲霉素最大限量为10μg/L。

目前，测定棒曲霉素的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)。尚未出台国家标准方法，仅有行业标准，SN/T2008-2007《进出口果汁中棒曲霉毒素的检测方法-高效液相色谱法》规定了棒曲霉毒素测定的HPLC法，SN/T1859-2007《饮料中棒曲霉素和5-羟甲基糠醛的测定方法-液相色谱-质谱法和气相色谱-质谱法》规定了棒曲霉素测定的GC-MS法、HPLC-MS法。上述方法均为测定果汁饮料中尤其是苹果汁中的棒曲霉素，未见有关果蔬酱中棒曲霉素的测定方法。其中GC-MS法均采用N，O-双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)为衍生剂，为了降低检测限，分别采用增加称样量，大体积溶剂提取，液-液分配净化，多个离子面积和来定量，方法存在过程冗长，操作步骤繁琐，费时，试剂用量大等不足。

用目前公开的果汁饮料中检测棒曲霉素的方法不适宜应用在果蔬酱中棒曲霉素的检测，国内外也未见有关快速、简便、灵敏度高、准确、专一、耐用的测定果蔬酱中棒曲霉素的方法的报道。因此，探索和研究快速，灵敏、准确、专一、耐用的果蔬酱中棒曲霉素的方法，对于维护食品安全，保护人民的身体健康和消费者的合法权益，促进食品行业的快速发展均具有重要意义。

发明内容

针对现有测定棒曲霉素方法存在过程冗长，操作步骤繁琐，费时，试剂用量大等不足，也未见有关快速、简便、灵敏度高、准确、专一、耐用的测定果蔬酱中棒曲霉素的方法的报道。

本发明的目的在于提供了一种测定果蔬酱中棒曲霉素的快速，简便、灵敏、准确、专一、耐用的确证和定量方法。

本发明具体提供了一种测定果蔬酱中棒曲霉素的确证和定量方法。

本发明的技术方案：通过采用N-甲基N-特丁基二甲基硅基三氟乙酰胺(MTBSTFA)为衍生剂，DB-35MS为色谱柱，建立了GC-MS法测定果蔬酱中棒曲霉素的高灵敏度方法，用乙酸乙酯-正己烷提取果蔬酱中棒曲霉素，碳黑小柱净化。通过选择性离子监测(SIM)模式选择离子的优化，消除果蔬酱基质影响，增强抗干扰能力，降低检测限和定量重现性。

本发明具体提供了一种快速测定果蔬酱中棒曲霉素的方法，果蔬酱经提取、净化，衍生，气相色谱-质谱测定，选择离子监测模式，外标法定量，具体测定方法步骤如下：

称取2.00克果蔬酱于离心管中，加水0.5-3mL，振摇，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)，振摇，同时加入0.5-2克海沙，4-8克无水硫酸钠和0.5-2克碳酸氢钠，剧烈振摇2min，离心3min。移取4mL上清液至乙酸乙酯活化碳黑小柱，用加有30μL冰乙酸的试管接受洗脱液，3-7mL乙酸乙酯洗脱。在40℃下通氮气缓缓吹干，240μL乙腈溶解，准确移取150μL溶解液至样品瓶中，加入50μL衍生化试剂，用隔垫密封，微波800W高档条件下反应1-7min，冷却，供气相色谱-质谱测定。

该方法是一种快速，简便、灵敏、准确、专一、耐用的确证和定量方法，广泛应用于果蔬酱中棒曲霉素检测领域。

本发明优先选用衍生化试剂为N-甲基N-特丁基二甲基硅基三氟乙酰胺(MTBSTFA)+特丁基二甲基硅基氯硅烷(TBDMCS)(99+1，V/V)。

本发明中隔垫密封优先采用PTFE/硅橡胶/PTFE隔垫密封。

同时，本发明通过系列实验验证了上述测定棒曲霉素的方法适用山楂酱、草莓酱、苹果酱、蓝莓酱等各种果酱和蔬菜酱。

进一步，本发明提供测定番茄酱中棒曲霉素的确证和定量方法，优选技术方案步骤如下：