[发明专利]一种植物样品中吲哚乙酸含量的酶传感测定方法

权利要求书

1.一种检测植物样品中IAA含量的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)在铂电极表面构建电化学酶传感器：以铂电极为基体电极，通过电聚合和共价交联等过程固定氧化酶后，构建一个传感器；

(2)绘制IAA电化学酶传感测定标准曲线：利用已构建的酶传感器测定不同浓度的IAA标准溶液。在工作底液磷酸缓冲液(PBS，pH 5.8)中依次加入不同浓度的IAA，然后采用循环伏安法测定电流。随着IAA浓度的变化，电流也随之发生变化。最后，以IAA浓度为横坐标，以电流的变化值为纵坐标绘制标准工作曲线。

(3)植物样品检测。用所构建的传感器测定植物样品的电流变化，根据标准曲线计算IAA含量。

2.根据权利要求1所述的检测植物样品中IAA含量的方法，其特征包括：

(1)中所述IAA电化学酶传感器的构建，首先要对电极进行修饰，以铂电极(PlatinumElectrode，Pt)作为传感器的基体电极，使用前电极需要依次经过6号金相砂纸、含1.0、0.3和0.05μm氧化铝悬浮液的麂皮上进行粗磨和抛光成镜面，并用水、乙醇超声清洗电极表面；

(1)中所述IAA电化学酶传感器的构建，对电极进行修饰后需进行硫堇电聚合，将洗净后的Pt电极置于三电极体系中浸泡在5mL含有5mmol/L的硫堇溶液和pH4.5醋酸-醋酸钠溶液当中，在-0.4～1.2V的电位范围内，以0.05V/s的扫描速度进行循环扫描。然后用双蒸水冲洗电极表面并干燥；

(1)中所述IAA电化学酶传感器的构建，电极硫堇电聚合后进行戊二醛共价交联，在电极表面滴加16μL浓度为2.5％的戊二醛溶液，在室温下静置1h后，洗净电极表面，吹干。取氧化酶16μL，滴加于电极表面，置于人工气候箱(37℃)中温育1h；

(1)中所述氧化酶为吲哚乙酸氧化酶或辣根过氧化物酶，用量范围：0.1～0.3mg；

(1)中所述IAA电化学酶传感器，构建好后进行循环伏安法测定IAA，将电极洗净并干燥，以PBS为工作底液，在其溶液中加入IAA，利用循环伏安法测定电流的变化；

(2)中所述的绘制标准曲线，在PBS(pH＝5.8)工作底液中依次加入不同浓度的IAA，然后采用循环伏安法测定电流。不同的IAA浓度有着不同的电流响应。根据两者对应的关系，以IAA浓度为横坐标，以电流的变化值为纵坐标绘制标准工作曲线。所得的标准曲线表明，在一定的浓度范围内，IAA浓度与电流呈一定的线性关系；

(3)中所述的植物样品检测，先从植物样品中提取和纯化IAA，然后将IAA滴加入工作底液(PBS)中，用该发明中所述的传感器测定IAA。