[发明专利]一个定向突变及遗传改造的重组质粒及其应用

权利要求书

1.一个定向突变及遗传改造的重组质粒，其特征在于，具有SEQ ID No：1的核苷酸序列，是表达耐辐射球菌热激蛋白GroEL基因的启动子PgroEL与卡那霉素抗性基因KanR的融合DNA片段，通过以下步骤获得：构建PgroEL启动子与卡那霉素结构基因的紧密融合，并在接合位点作了变动，PgroEL启动子核糖体结合位点(RBS)后的CACATG替换成CATATG(即NdeI酶切位点)，该酶切位点的后三个碱基ATG作为卡那霉素抗性基因起始翻译位点。

2.根据权利要求1所述的一个定向突变及遗传改造的重组质粒，其特征在于，设计克隆GroEL启动子PgroEL的引物：

上游引物P1：5’CATAGAAGCTTCGTATTGTCGCCCTACATA T3’，

下游引物P2：5’GATCAAGCATATGGGGTCCTCCTGTG 3’，

PCR扩增GroEL的启动子片段S1，同时以pET-29b质粒为模板，

上游引物P3：5’TCATCACATATGAGCCATATTCAACGGG AAACGTC 3’，

下游引物P4：5’ACAGACGGATCCTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATG 3’，克隆卡那霉素抗性基因S2。

3.根据权利要求1所述的一个定向突变及遗传改造的重组质粒在作为构建耐辐射球菌以及耐辐射球菌属其它菌株的目的基因突变株的筛选标记中的应用。

4.根据权利要求1所述的一个定向突变及遗传改造的重组质粒在作为构建耐辐射球菌以及耐辐射球菌属其它菌株遗传改造成工程菌的筛选标记中的应用。