[发明专利]一种检测感染马铃薯的病毒的方法及其专用引物

权利要求书

1.辅助检测感染马铃薯的病毒的专用引物，包括如下五对引物中的至少一对：

引物对I：序列表的序列1和序列表的序列2所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对II：序列表的序列3和序列表的序列4所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对III：序列表的序列5和序列表的序列6所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对IV：序列表的序列7和序列表的序列8所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对V：序列表的序列9和序列表的序列10所示核苷酸序列组成的引物对；

所述感染马铃薯的病毒为烟草花叶病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯V病毒或烟草环斑病毒。

2.如权利要求1所述的专用引物，其特征在于：所述专用引物由所述引物对I、所述引物对II、所述引物对III、所述引物对IV和所述引物对V组成。

3.权利要求1或2所述专用引物在辅助检测感染马铃薯的病毒中的应用；所述感染马铃薯的病毒为烟草花叶病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯V病毒或烟草环斑病毒。

4.权利要求1或2所述专用引物在制备辅助检测感染马铃薯的病毒的试剂盒中的应用；所述感染马铃薯的病毒为烟草花叶病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯V病毒或烟草环斑病毒。

5.一种辅助检测感染马铃薯的病毒的试剂盒，它包括权利要求1或2所述专用引物；所述感染马铃薯的病毒为烟草花叶病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯V病毒或烟草环斑病毒。

6.权利要求5所述试剂盒在辅助检测感染马铃薯的病毒中的应用；所述感染马铃薯的病毒为烟草花叶病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯V病毒或烟草环斑病毒。

7.一种辅助检测待测生物样本中含有哪种或哪几种感染马铃薯的病毒的方法，所述感染马铃薯的病毒为烟草花叶病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯V病毒或烟草环斑病毒，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

以待测样本的cDNA为模板，权利要求1至3中任一所述专用引物进行PCR，检测PCR产物；如果得到152bp的PCR产物，则待测样本中含有烟草花叶病毒；如果得到879bp的PCR产物，则待测样本中含有马铃薯X病毒；如果得到563bp的PCR产物，则待测样本中含有马铃薯Y病毒；如果得到615bp的PCR产物，则待测样本中含有马铃薯V病毒；如果得到343bp的PCR产物，则待测样本中含有烟草环斑病毒。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述PCR的反应参数为：94℃、15min；94℃、30sec，60℃、30sec，72℃、70sec，34个循环；72℃、10min。

9.如下(a)或(b)或(c)的引物对：

(a)用于检测目的DNA的引物对，由针对目的DNA的上游引物和下游引物组成，其特征在于：所述上游引物和所述下游引物自5’端至3’端依次为结合区、连接区和保证特异性延伸区；所述结合区由18-25个与待测的目的DNA的保守区域互补的核苷酸组成；所述连接区由4-8个脱氧次黄嘌呤核苷酸组成；所述保证特异性延伸区由6-12与待测的目的DNA的保守区域互补的核苷酸组成；

(b)用脱氧次黄嘌呤核苷酸取代(a)所述引物对中的所述结合区和/或所述保证特异性延伸区中的核苷酸，得到的引物对；

(c)用于检测目的RNA的引物对，由针对目的RNA的上游引物和下游引物组成，其特征在于：所述上游引物和所述下游引物自5’端至3’端依次为结合区、连接区和保证特异性延伸区；所述结合区由18-25个与待测的目的RNA的保守区域互补的核苷酸组成；所述连接区由4-8个脱氧次黄嘌呤核苷酸组成；所述保证特异性延伸区由6-12与待测的目的RNA的保守区域互补的核苷酸组成。

10.如权利要求9所述的引物对，其特征在于：所述引物对为如下五对引物中的任意一对：

引物对I：序列表的序列1和序列表的序列2所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对II：序列表的序列3和序列表的序列4所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对III：序列表的序列5和序列表的序列6所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对IV：序列表的序列7和序列表的序列8所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对V：序列表的序列9和序列表的序列10所示核苷酸序列组成的引物对。