[发明专利]一种基于毛细管区带电泳方式的细胞活性检测方法

权利要求书

1.一种基于毛细管区带电泳方式的细胞活性检测方法，其特征在于包括 以下步骤：

步骤一、对待测细胞样品进行预处理

用细胞染料将待测细胞染色，离心后移去上清液，再加入磷酸盐缓冲液清 洗细胞，直至将残留细胞染料洗净为止；之后，向清洗后的细胞沉淀中加入细 胞固定液，由此对细胞进行固定化处理，细胞固定液和固定时间根据细胞染料 特点和细胞性质进行选择；最后，用磷酸盐缓冲液清洗细胞，直至除去剩余的 细胞固定液；

其中，所述细胞染料为各种活细胞染料；所述细胞固定液为常用细胞固定 液中的任意一种；

步骤二、进行细胞悬浮液的配制

向步骤一得到的细胞沉淀中加入电泳缓冲液，混匀后得到细胞悬浮液；然 后，用细胞计数板计数确定出细胞浓度，再用电泳缓冲液调节细胞浓度至10⁴-10⁷个/ml范围；

其中，所述电泳缓冲液选用常用毛细管电泳缓冲液中的任意一种；

步骤三、采用毛细管电泳仪进行毛细管区带电泳检测细胞

将步骤二中配制好的细胞悬浮液转移至毛细管电泳进样瓶中，采用压力进 样或电进样，使细胞悬浮液进入毛细管一端；然后加电压，使细胞悬浮液在毛 细管内移动并通过二极管阵列检测器；此时，在选定的紫外波长和可见波长下 同时检测进样细胞，将所有电泳峰的峰面积相加，得到峰面积总和，由其表示 细胞在相应波长下的吸光值，用紫外和可见两波长的吸光值的乘积即可表示细 胞活性的量值；

其中，所述毛细管区带电泳所用毛细管的长度为30-60cm，内径为 10-100μm；采用压力进样时的压强为5-250mbar，进样时间为3-30s；采用电进 样方式时，电压为500V-30KV，进样时间为3-30s；加电压时的电泳电压为 5-30KV；检测时采用的紫外波长范围为180-300nm，可见波长直接采用细胞染 料的最大吸收波长值。

2.如权利要求1所述的一种基于毛细管区带电泳方式的细胞活性检测方法， 其特征在于：所述步骤一中的固定化处理过程在15-30℃温度范围内进行。