[发明专利]带有绿色荧光蛋白标记的DC-SIGNR体外表达质粒及其构建方法无效
| 申请号： | 201010104211.1 | 申请日： | 2010-02-01 |
| 公开（公告）号： | CN101768599A | 公开（公告）日： | 2010-07-07 |
| 发明（设计）人： | 许利军 | 申请（专利权）人： | 福州市传染病医院;许利军 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/65;C12N15/12 |
| 代理公司： | 福州智理专利代理有限公司 35208 | 代理人： | 黄秀婷;丁秀丽 |
| 地址： | 350025*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 带有 绿色 荧光 蛋白 标记 dc signr 体外 表达 质粒 及其 构建 方法 | ||
1.一种带有绿色荧光蛋白标记的DC-SIGNR体外表达质粒，其特征在于：它是以绿色荧光蛋白peGFP-N1为载体，由树突状细胞表面的树突状细胞特异的胞间黏附分子3捕获非整合相关素DC-SIGNR编码序列和绿色荧光蛋白peGFP-N1序列融合在一起构建而成的绿色荧光蛋白表达质粒DC-SIGNR-GFP。
2.根据权利要求1所述的带有绿色荧光蛋白标记的DC-SIGNR体外表达质粒，其特征在于：所述的树突状细胞表面的树突状细胞特异的胞间黏附分子3捕获非整合相关素DC-SIGNR编码序列在与绿色荧光蛋白peGFP-N1序列融合之前，先通过转录在DC-SIGNR起始端加入了HindIII位点，在DC-SIGNR末端加入了BamHI位点。
3.根据权利要求1所述的带有绿色荧光蛋白标记的DC-SIGNR体外表达质粒的构建方法，其特征在于：它包括以下步骤：
(1)从外周血单个核细胞获得总RNA；
(2)将获得的总RNA用逆转录方法获取cDNA；
(3)采用所述cDNA作为模板，使用高保真DNA聚合酶，以带有酶切位点的引物进行扩增，从而获得全长的DC-SIGNR；
(4)将获得的DC-SIGNR和载体peGFP-N1分别进行酶切，酶切产物通过切胶回收后，采用T4连接酶，使回收所得的DC-SIGNR和载体peGFP-N1进行连接反应，从而构建DC-SIGNR的绿色荧光蛋白表达质粒DC-SIGNR-GFP。
4.根据权利要求3所述的带有绿色荧光蛋白标记的DC-SIGNR体外表达模型的构建方法，其特征在于：步骤(3)采用的引物序列如下：
P1：5-CCCAAGCTTGGGAAACATGAGTGACTCCAAGGAACCA-3，引物中含有HindIII位点；
P2：5-CGGGATCCCGTTCGTCTCTGAAGCAGGCTGCGGGC-3，引物中含有BamHI位点。
5.根据权利要求3所述的带有绿色荧光蛋白标记的DC-SIGNR体外表达模型的构建方法，其特征在于：步骤(4)中，进行连接反应的DC-SIGNR和载体peGFP-N1的摩尔数比为3∶1，连接产物转化入大肠杆菌后，经过卡那霉素筛选，挑取单克隆，扩增细菌后，便成功提取绿色荧光蛋白表达质粒DC-SIGNR-GFP。
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