[发明专利]一种人血清中肿瘤标记物Bicr6蛋白的质谱筛选方法无效
申请号: | 201010105550.1 | 申请日: | 2010-02-04 |
公开(公告)号: | CN101793882A | 公开(公告)日: | 2010-08-04 |
发明(设计)人: | 沈锡中;薛如意;刘韬韬;董玲 | 申请(专利权)人: | 复旦大学附属中山医院 |
主分类号: | G01N30/72 | 分类号: | G01N30/72 |
代理公司: | 上海申汇专利代理有限公司 31001 | 代理人: | 翁若莹 |
地址: | 200032 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 血清 肿瘤 标记 bicr6 蛋白 筛选 方法 | ||
1.一种人血清中肿瘤标记物Bicr6蛋白的质谱筛选方法,其特征在于,具体步骤为:
第一步:采取人全血,4摄氏度下凝固1小时,离心,取上层血清,保存在-80摄氏度冰箱中,将弱阳离子交换磁珠或免疫金属亲和铜离子磁珠与磁珠结合液在薄壁PCR管中混合,加入血清样本,室温孵育5min,将薄壁PCR管置于磁珠分离器内进行磁珠分离,移去上清,将所剩磁珠用磁珠洗涤液洗涤后,加入磁珠洗脱液,将薄壁PCR管置于磁珠分离器内进行磁珠分离,得到洗脱液,将洗脱液与磁珠稳定液混合得到磁珠富集液;
第二步:将第一步得到的磁珠富集液加入基质溶液,按以下条件进行基质辅助激光解离电离飞行时间质谱检测:第一离子源电压:20kv;第二离子源电压:18.6kv;晶体电压:7.6kv;脉冲离子时间:320ns;极性:正;矩阵抑制模式:门控;门控强度:最大;抑制高限:600Da;检测器:1400-1500v;样本率:1.00Gs/s;电子获取:增强,100mv;实时流畅:高;激光频率:20Hz;激光衰减:关73%,范围20%;峰检测标准:信噪比大于5,2Da峰宽过滤,最多峰数200;
第三步:分析第二步得到的质谱图,观察质谱图中质荷比为4964±1处是否有峰,若有峰,则血清中含有Bicr6蛋白。
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