[发明专利]一种从带鱼鱼骨中提取多糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多糖的制备方法，具体涉及一种从带鱼鱼骨中提取多糖的方法。

背景技术

目前已有很多利用鲨鱼、魟鱼等软骨鱼制备软骨多糖的文献报道，但还没有利用带鱼(硬骨鱼)鱼骨来制备多糖的研究报道。现有的对软骨多糖的提取、纯化采用的方法主要是酶解法，步骤包括：软骨粉碎、经碱液处理、酶解、纯化。这种方法的缺点是：酶解速度较慢，酶用量大，反应时间长，纯化时采用多次溶解再沉淀的方法，酒精用量大，并且产品收率低。

发明内容

本发明为了克服上述酶用量大、酶解时间长、酒精用量大的不足，提供了一种从带鱼鱼骨中提取多糖的方法，本方法减少了酶用量，缩短了酶解时间，降低了成本，本方法制得的多糖纯度高，质量好。

本发明是通过以下措施来实现的：

一种从带鱼鱼骨中提取多糖的方法，包括以下步骤：

(1)鱼骨预处理：将新鲜带鱼鱼骨去肉、水煮去掉鱼骨中的油脂，然后将鱼骨清洗、粉碎、过筛，得直径小于30目的鱼骨粉末；

(2)碱处理：在上述步骤(1)中的鱼骨粉末中加入水和碱，机械搅拌一段时间，使鱼骨完全溶解；

(3)酶解：碱处理后，在鱼骨液中加入蛋白酶和酶激活剂，在蛋白酶的适宜pH和温度下对鱼骨进行酶解；

(4)灭活酶，过滤：将鱼骨液中的蛋白酶灭活，然后过滤取滤液；

(5)氧化：在滤液中加入双氧水，对滤液进行氧化处理；

(6)吸附除杂：在滤液中加入Ca₃(PO₄)₂除去滤液中的杂质；

(7)过滤，酒精沉淀，脱水，干燥，制得多糖。

本方法中的酒精沉淀过程为本领域技术人员的公知技术，在用Ca₃(PO₄)₂吸附除杂后只用一次酒精沉淀就能很好的提取出多糖，减少了酒精用量，酒精沉淀的过程为：向滤液中加入体积分数为95％的酒精，并不断搅拌，使得溶液中酒精的体积含量为55～70％，停止搅拌，静置至多糖充分沉淀，然后去掉上层酒精。

在上述制备方法中，用酸或碱调节鱼骨液的pH，所用的酸可以为稀盐酸、稀硫酸、稀磷酸、柠檬酸或其他对反应无影响起到调节pH作用的酸；所用的碱可以为氢氧化钠、氢氧化钾或其他对反应无影响起到调节pH作用的碱。

在上述制备方法中，步骤(1)中水煮的目的是充分除去鱼骨中的油脂，水煮温度一般大于90℃，水煮时间可为10～180分钟。

在上述制备方法中，步骤(2)中所述碱为氢氧化钠或氢氧化钾，水的加入量为鱼骨质量的0.2～10倍，碱的加入量为50～8000mmol/100g鱼骨，机械搅拌速度为200～3000r/min，处理时间为30～600min。其中，水的加入量优选鱼骨质量的2～3倍，碱的加入量优选200～900mmol/100g鱼骨。

在上述制备方法中，步骤(3)中所述蛋白酶为市售酶，它包括中性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶或酸性蛋白酶，所述酶激活剂为氯化钙、醋酸钙、柠檬酸钙；工艺条件为：酶的用量为10～14000U/g鱼骨，酶激活剂用量为酶质量的0.1％～20％，pH为2～12，反应温度为40～70℃，反应时间30～480min。其中，酶的用量优选50～200U/g鱼骨，酶激活剂用量优选酶质量的0.5％～10％，反应温度优选48～55℃，反应时间优选180～240min。

在上述制备方法中，步骤(4)中先将鱼骨液pH调节至5.0～9.0，然后在60～95℃下灭活酶。

在上述制备方法中，步骤(5)中双氧水的质量浓度为30％，加入量为滤液总体积的1‰～50‰，氧化的pH值为10～12，氧化时间为30～180min。

在上述制备方法中，步骤(6)工艺条件为：Ca₃(PO₄)₂加入量为滤液质量的2‰～50‰，pH值为5.5～7.5，机械搅拌速度为200～3000r/min，时间为30～120min。

有益效果：本发明工艺简单、易于操作、能耗低，酶解过程中使用酶激活剂，减少了酶的用量，缩短了酶解时间，采用Ca₃(PO₄)₂(吸附剂)吸附除杂，彻底除去了杂质，避免了多次酒精沉淀，节省了酒精用量，降低了生产成本，用本方法制得的多糖质量好，纯度大于95％。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行进一步阐述，下述说明只是示例性的，并不对本发明进行限制。