[发明专利]一种标记细胞骨架蛋白的多肽及其真核表达载体无效
申请号: | 201010106085.3 | 申请日: | 2010-01-19 |
公开(公告)号: | CN101880321A | 公开(公告)日: | 2010-11-10 |
发明(设计)人: | 张斌;王涛;药立波 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军第四军医大学 |
主分类号: | C07K14/47 | 分类号: | C07K14/47;C07K1/13;C12N15/62;C12N15/79;G01N21/64 |
代理公司: | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人: | 陆万寿 |
地址: | 710032 *** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 标记 细胞骨架 蛋白 多肽 及其 表达 载体 | ||
1.一种标记细胞骨架蛋白的多肽,其特征在于:该多肽为JN27,其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。
2.如权利要求1所述的标记细胞骨架蛋白的多肽,其特征在于:所述的多肽是在JN27的C端增加3个氨基酸残基得到的多肽JN30,其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。
3.如权利要求1所述的标记细胞骨架蛋白的多肽,其特征在于:所述的多肽是在JN27的N端增加11个氨基酸残基的穿膜肽得到的多肽TatJN27,其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.3所示。
4.一种用于细胞骨架蛋白标记的真核表达载体,其特征在于:该载体包含标记基因EGFP和细胞骨架蛋白靶向基因的融合基因,所述的细胞骨架蛋白靶向基因为基因JN27或JN30;
基因JN27的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.4所示,基因JN30的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.5所示。
5.如权利要求4所述的用于细胞骨架蛋白标记的真核表达载体,其特征在于:所述的真核表达载体是pEGFP-C2-JN27,通过HindIII和BamHI酶切位点将基因JN27克隆到pEGFP-C2载体上。
6.如权利要求4所述的用于细胞骨架蛋白标记的真核表达载体,其特征在于:所述的真核表达载体是pEGFP-C2-JN30,通过HindIII和BamHI酶切位点将基因JN30克隆到pEGFP-C2载体上。
7.多肽JN27、JN30或TatJN27应用于细胞骨架蛋白的标记。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于:将多肽JN27或JN30用荧光物质标记后,再将荧光标记的JN27或JN30加入到抗体封闭液中,与经过固定、Triton处理的待标记细胞孵育2h,然后在荧光显微镜下显示标记结果;
将多肽TatJN27用荧光物质标记后,再将荧光标记的TatJN27直接加入待标记细胞的培养液中,37℃孵育12h;然后在荧光显微镜下显示标记结果。
9.真核表达载体pEGFP-C2-JN27或pEGFP-C2-JN30应用于细胞骨架蛋白的标记。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于:将真核表达载体pEGFP-C2-JN27或pEGFP-C2-JN30转染到待标记的细胞中,使其得到表达后,然后在荧光显微镜下显示标记结果。
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