[发明专利]一种食品过敏原甲壳类基因的恒温扩增检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种食品过敏原甲壳类基因的恒温扩增检测试剂盒，其特征是包括如下部分：

a)DNA裂解液：

pH8.0、浓度为10mmol/L的Tris-HCl缓冲液，含有质量浓度为1％的chelex树脂；

b)恒温扩增反应液：

包含正向外围引物、反向外围引物、两条探针、一条交叉扩增引物、1×Thermolbuffer、MgSO₄、dNTPs、Bst DNA聚合酶和无菌双蒸水；其中：

所述的正向外围引物序列为5’-GATTAAGTTACTTTAG-3’；

所述的反向外围引物序列为5’-GATTTAAAGGTCGAACAG-3’；

所述的两条探针的序列分别为：5’-TTCAACATCGAGGTCGC-3’和5’-TGTCGATATGAACTCTC-3’，其中一条探针的5’端标记生物素，另外一条探针5’端标记FitC；

所述的交叉引物为：5’-TTCAACATCGAGGTCGCTTTAGGGATAACAGCGT-3’；

所述的1×Thermol buffer含有摩尔浓度为20mM的Tris-HCl、10mM的KCl、10mM的(NH₄)₂SO₄、2mM的MgSO₄以及质量浓度为0.1％的Triton X-100，pH 8.8。

2.根据权利要求1所述的食品过敏原甲壳类基因的恒温扩增检测试剂盒，其特征是包含阳性对照模板，该阳性对照模板为含有甲壳类食品过敏源16S rRNA基因片段的质粒。

3.一种权利要求1的食品过敏原甲壳类基因的恒温扩增检测试剂盒检测食品过敏原甲壳类基因的方法，其特征是包括下列步骤：

a)用DNA裂解液从待检测的标本中提取DNA；

b)将步骤a)提取的DNA作为模板，加入到装有恒温扩增反应液的PCR管中，在58℃下扩增反应80分钟；对照PCR管中分别加入标准阳性模板和标准阴性模板，其中，阳性对照模板为含有甲壳类食品过敏源16S rRNA基因，所述阴性对照模板为无菌双蒸水；

c)将反应后的PCR管放置到核酸防污染检测装置中进行检测，15min以后判读结果，当试纸条的检测线呈阳性时，说明样品中含有甲壳类食品过敏源核酸。