[发明专利]蛹虫草退化菌种快速鉴定方法

权利要求书

1.一种蛹虫草（Cordyceps militaris（L.）Link）退化菌种快速鉴定方法，其特征在于：包括 以下步骤：

a)将蛹虫草菌种接种至固体PDA培养基进行一级菌种活化培养，然后将获得的一级菌 种转接至液体PDA培养基中进行二级液体培养，得到蛹虫草二级液体菌种，经过滤 获得蛹虫草的孢子液；

b)将a）步骤获得孢子液转接到色度培养基中，使每毫升色度培养基中含有孢子1×10³~1 ×10⁶个，然后在常规培养条件下振荡培养；

c)8-15天后，取出孢子培养液，观察孢子培养液的颜色，当孢子培养液的颜色为蓝色或 者绿色时，判断该蛹虫草菌种为退化菌种；

所述的色度培养基的组分如下：按质量分数100%计，酵母粉0.45%、细菌蛋白胨0.75%、 乳糖0.5%、溴麝香草酚蓝0.025‰、余量为水。

2.根据权利要求1所述的蛹虫草退化菌种快速鉴定方法，其特征在于：所述的b）步骤为先 用液体PDA培养基将a）步骤获得孢子液稀释至浓度为1×10⁵~1×10⁸个/mL，然后再接入 到色度培养基中。

3.根据权利要求1或2所述的蛹虫草退化菌种快速鉴定方法，其特征在于：所述的一级菌 种活化培养是将分离纯化的蛹虫草菌种接种至经灭菌的固体斜面PDA培养基，20～25℃， 避光培养7～10天，至白色绒毛状菌丝长满斜面，获得一级菌种；所述的二级液体培养 是将一级菌种从平板上接种至经灭菌的液体PDA培养基中，常规条件下振荡培养5～7 天，至菌球充满液体培养基，获得二级液体菌种。

4.一种蛹虫草退化菌种快速鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：

a)将蛹虫草菌种接种至固体PDA培养基进行一级菌种活化培养，然后将获得的一级菌 种转接至液体PDA培养基中进行二级液体培养，得到蛹虫草二级液体菌种，经过滤 获得蛹虫草的孢子液；

b)将a）步骤获得孢子液转接到色度培养基中，使每毫升色度培养基中含有孢子1×10³~1 ×10⁶个，然后在常规培养条件下振荡培养，按上述孢子液与其接入的色度培养基的 体积比将液体PDA培养基接入到色度培养基内，同等条件下进行培养作为对照液；

c)8-15天后，取出孢子培养液和对照液，然后将孢子培养液和对照液离心去除菌丝和孢 子，取上清液，测定两种上清液的OD₆₁₅，用公式计算菌种的脱色率D＝[1-（孢子 培养液的上清液OD₆₁₅/对照液的上清液OD₆₁₅）]×100%，当脱色率D<20时，判断该 蛹虫草菌种为退化菌种；

所述的色度培养基的组分如下：按质量分数100%计，酵母粉0.45%、细菌蛋白胨0.75%、 乳糖0.5%、溴麝香草酚蓝0.025‰、余量为水。

5.根据权利要求4所述的蛹虫草退化菌种快速鉴定方法，其特征在于：所述的b）步骤为先 用液体PDA培养基将a）步骤获得孢子液稀释至浓度为1×10⁵~1×10⁸个/mL，然后再接入 到色度培养基中。

6.根据权利要求4或5所述的蛹虫草退化菌种快速鉴定方法，其特征在于：所述的一级菌 种活化培养是将分离纯化的蛹虫草菌种接种至经灭菌的固体斜面PDA培养基，20～25℃， 避光培养7～10天，至白色绒毛状菌丝长满斜面，获得一级菌种；所述的二级液体培养 是将一级菌种从平板上接种至经灭菌的液体PDA培养基中，常规条件下振荡培养5～7 天，至菌球充满液体培养基，获得二级液体菌种。