[发明专利]海水养殖池塘底泥微生物基因组DNA的提取方法

权利要求书

1.一种海水养殖池塘底泥微生物基因组DNA的提取方法，依次按照如下步骤进行：

a.取0.3～0.5g底泥样品于离心管中，加入800～1000μl预处理缓冲液，涡旋混匀；所述预处理缓冲液为100μl pH 5.5的1M Tris-HCl buffer、700μl超纯水以及200μl 0.2M Al₂(SO₄)₃的混合溶液；

b.用4M NaOH调a步骤所得溶液的pH至8，3500g×2min离心弃上清，取沉淀；

c.向所得沉淀中加入300～400μl浓度为5mg/ml的溶菌酶涡旋混匀，再加入100～120μl浓度为10％的SDS、15～25ul 25mg/ml蛋白酶K，涡旋混匀；

d.加入200～400μl 5M NaCl涡旋混匀，加入180～280μl 65℃预热的CTAB-NaCl，涡旋混匀，65℃作用20min后11,000g×1min离心取上清；

e.在上清液中加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，涡旋混匀，11,000g×15min离心取上清，酚/氯仿/异戊醇的体积比为25∶24∶1；

f.加入等体积的氯仿/异戊醇涡旋混匀，氯仿/异戊醇的体积比为24∶1，11,000g×15min离心取上清；

g.重复步骤f一次；

h.将上清移至1.5ml离心管，加入0.7倍体积异丙醇、0.1倍体积5M NaCl，室温过夜，18,000g×30min离心弃上清，向沉淀中加入1ml预冷70％乙醇重悬、洗涤；

i.18,000g×30min离心后弃除上清，干燥沉淀，加入30～50μl1×TE，4℃溶解至少4h。