[发明专利]牛分枝杆菌Taqman荧光定量PCR检测方法

权利要求书

1.一种牛分枝杆菌Taqman荧光定量PCR检测用引物及探针，其中，

上游引物为：5’-TGAAGTAGTAATGTGCGAGCTGAG-3’；

下游引物为：5’-CGTTGTAGGCCACTCCAAGAG-3’；以及

探针为：5’-JOE-CGCTTCTGCACGACTACGGCTTGTATGA-Eclipse-3’。

2.一种含权利要求1所述引物及探针的检测试剂盒。

3.一种利用权利要求1所述的引物及探针检测牛分枝杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)目的基因的扩增

以牛分枝杆菌基因组DNA为模板，进行PCR反应，其中，PCR上游引物为5’-ATCGTGAATCGTCGAGTGATG-3’，下游引物为5’-ACCCAGAAGGCGAACAGA-3’，回收PCR扩增产物；

2)目的基因的克隆

将步骤1)的目的基因连接在PGEM-T easy载体上并转化至大肠杆菌感受态细胞，筛选阳性转化子，进行PCR检测并测序，提取阳性重组质粒，计算重组质粒的拷贝数；

3)Taqman荧光定量PCR检测

以阳性重组质粒DNA为模板，利用权利要求1所述引物及探针，进行Taqman荧光定量PCR检测。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其中Taqman荧光定量PCR检测的退火温度为50.5℃。